文心兰OnEIN2的基因特性与CRISPR/Cas9介导的基因编辑研究
发布时间：2020-12-18 14:47
文心兰（Oncidesa）是兰科（Orchidaceae）文心兰属植物,是世界上重要的盆花和鲜切花种类之一,具有较高的经济价值。在鲜切花的生产和运输中造成的机械损伤而产生的乙烯易使其花瓣衰老较快。这是制约其更广泛的应用的一大因素,至今只能通过一些药剂等手段暂缓其花瓣的衰老,还未从源头上得到解决,因此选育乙烯不敏感型的文心兰品种是文心兰育种的一大重要方向。乙烯不敏感蛋白（ethylene-insensitive 2,EIN2）作为乙烯信号转导过程中的关键枢纽,对乙烯反应机制的完成有着重要影响。现已证实EIN2基因突变时可以实现乙烯不敏感,阻断乙烯信号的传导过程,从而使乙烯反应不能完成。本研究以文心兰’南茜’为材料,利用兰花转录组数据,通过RT-PCR以及RACE技术克隆获得EIN2基因,并通过实时荧光定量PCR以及转化文心兰原球茎、愈伤组织、原生质体的研究,对该基因进行初步的功能验证。本文研究的主要结果如下:1文心兰OnEIN2基因的克隆与生物信息学分析本研究基于AtEIN2的核酸序列作为参考,与南茜转录组数据库进行比对分析,获得一条相似度较高的cDNA序列。设计引物利用RT-PCR结合...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统的作用机制?（２０１５瞿礼嘉［１８］）??Ｆｉ．?１－２?Ｔｈｅ?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＣＲＩＳＰＲ?／?Ｃａｓ?Ｓｓｔｅｍ??
?文心兰的基因特性与ＣＲ〖ＳＰＲ／Ｃａｓ９介导的基因编辑研究???列约为２６￣７２ｂｐ＿。间隔序列可对外源ＤＮＡ进行识别，由Ｃａｓ基因编码的高度??保守的核酸相关蛋白与ＣＲＩＳＰＲ转录出的ＲＮＡ结合成蛋白复合物，共同运用??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统以防止外来遗传物质⑵】。??Ｓｐａｃｅｒｓ??
如种子的萌发、苗的生长、叶的伸展、花的开放和衰老以及果实成熟等［８２】；乙??烯合成后通过一系列的途径诱导植物对乙烯的生物化学反应。经过多年的研宄，??目前已有一条近似线性的乙烯信号转导途径（图１＿３），在这个信号转导途径??中相关的基因有乙烯受体基因，铜离子转运基因，ＥＩＮ２，?ＥＩＮ３／ＥＩＬｓ，ＥＲＦ等；??乙烯受体在感受到乙烯信号后，通过下游的乙烯受体ＣＴＲ１，激活ＥＩＮ２，随后??将信号传到细胞核中的ＥＩＮ３／ＥＩＬＳ上再促进转录因子ＥＲＦ的表达，从而完成一??系列的乙烯反应【＊３］。??１０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]乙烯和水杨酸信号转导在拟南芥对聚乙二醇胁迫应答中的相互作用[J]. 李光哲,李玲美,姚展鹏,柳福丹. 沈阳师范大学学报(自然科学版). 2017(02)
[2]香蕉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系的建立[J]. 胡春华,邓贵明,孙晓玄,左存武,李春雨,邝瑞彬,杨乔松,易干军. 中国农业科学. 2017(07)
[3]基于CRISPR/Cas9技术的月季TCP9基因转化拟南芥[J]. 谢磊,王姗珊,胡博文,熊兴耀,陈己任. 分子植物育种. 2017(03)
[4]水稻LOC_Os10g05490位点冷胁迫条件下表达分析及CRISPR/Cas9定向编辑[J]. 沈春修. 浙江农业学报. 2017(02)
[5]文心兰OnERS1全长基因克隆及表达分析[J]. 田晓岩,杨翠萍,胡进,闫冰玉,巩笑笑,庄玉粉,潘英文,刘进平. 分子植物育种. 2017(04)
[6]A detailed procedure for CRISPR/Cas9-mediated gene editing in Arabidopsis thaliana[J]. Wenshan Liu,Xiaohong Zhu,Mingguang Lei,Qingyou Xia,Jose Ramon Botella,Jian-Kang Zhu,Yanfei Mao. Science Bulletin. 2015(15)
[7]文心兰类原球茎的愈伤组织诱导及其植株再生[J]. 黄霞,卢禹. 广西植物. 2016(09)
[8]PEG介导番木瓜叶肉原生质体瞬时表达体系的建立[J]. 霍鹏,言普,沈文涛,周鹏. 分子植物育种. 2015(04)
[9]CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 李聪,曹文广. 生物工程学报. 2015(11)
[10]CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展[J]. 郑小梅,张晓立,于建东,郑平,孙际宾. 生物技术进展. 2015(01)
博士论文
[1]基于CRISPR/Cas9的拟南芥多基因编辑及其在基因功能研究中的应用[D]. 刘玟杉.重庆大学 2015
[2]CRISPR/Cas9基因定点突变体系构建与大豆抗旱相关gma-miR160功能研究[D]. 孙现军.西北农林科技大学 2015
[3]甜瓜果实发育相关基因的鉴定、表达特性及功能分析[D]. 高峰.内蒙古大学 2013
[4]番茄中茉莉酸与其他激素信号的相互作用研究[D]. 贾承国.浙江大学 2009
硕士论文
[1]文心兰离体培养优化及转化铁氧还蛋白基因研究[D]. 吴晓佩.福建农林大学 2017
[2]利用CRISPR/Cas9技术编辑甘蓝基因的初步研究[D]. 马存发.西南大学 2017
[3]CRISPR/Cas9介导的大豆基因组定点编辑研究[D]. 蔡宇鹏.中国农业科学院 2016
[4]文心兰乙烯代谢相关基因克隆与表达及ACO功能验证[D]. 李玲.福建农林大学 2014
[5]铁棍山药类原球茎诱导增殖及植株再生的研究[D]. 李纪强.河南师范大学 2013
[6]转基因兰花培养物继代保持及文心兰ACO基因克隆与表达分析[D]. 林鹤延.福建农林大学 2012
[7]根癌农杆菌介导ACS反义基因转化文心兰的研究[D]. 金苹.福建农林大学 2009
[8]番茄LeEIN2基因的克隆及其功能研究[D]. 汪佳.重庆大学 2006
本文编号：2924181
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统的作用机制?（２０１５瞿礼嘉［１８］）??Ｆｉ．?１－２?Ｔｈｅ?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＣＲＩＳＰＲ?／?Ｃａｓ?Ｓｓｔｅｍ??
?文心兰的基因特性与ＣＲ〖ＳＰＲ／Ｃａｓ９介导的基因编辑研究???列约为２６￣７２ｂｐ＿。间隔序列可对外源ＤＮＡ进行识别，由Ｃａｓ基因编码的高度??保守的核酸相关蛋白与ＣＲＩＳＰＲ转录出的ＲＮＡ结合成蛋白复合物，共同运用??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统以防止外来遗传物质⑵】。??Ｓｐａｃｅｒｓ??
如种子的萌发、苗的生长、叶的伸展、花的开放和衰老以及果实成熟等［８２】；乙??烯合成后通过一系列的途径诱导植物对乙烯的生物化学反应。经过多年的研宄，??目前已有一条近似线性的乙烯信号转导途径（图１＿３），在这个信号转导途径??中相关的基因有乙烯受体基因，铜离子转运基因，ＥＩＮ２，?ＥＩＮ３／ＥＩＬｓ，ＥＲＦ等；??乙烯受体在感受到乙烯信号后，通过下游的乙烯受体ＣＴＲ１，激活ＥＩＮ２，随后??将信号传到细胞核中的ＥＩＮ３／ＥＩＬＳ上再促进转录因子ＥＲＦ的表达，从而完成一??系列的乙烯反应【＊３］。??１０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]乙烯和水杨酸信号转导在拟南芥对聚乙二醇胁迫应答中的相互作用[J]. 李光哲,李玲美,姚展鹏,柳福丹. 沈阳师范大学学报(自然科学版). 2017(02)
[2]香蕉CRISPR/Cas9基因编辑技术体系的建立[J]. 胡春华,邓贵明,孙晓玄,左存武,李春雨,邝瑞彬,杨乔松,易干军. 中国农业科学. 2017(07)
[3]基于CRISPR/Cas9技术的月季TCP9基因转化拟南芥[J]. 谢磊,王姗珊,胡博文,熊兴耀,陈己任. 分子植物育种. 2017(03)
[4]水稻LOC_Os10g05490位点冷胁迫条件下表达分析及CRISPR/Cas9定向编辑[J]. 沈春修. 浙江农业学报. 2017(02)
[5]文心兰OnERS1全长基因克隆及表达分析[J]. 田晓岩,杨翠萍,胡进,闫冰玉,巩笑笑,庄玉粉,潘英文,刘进平. 分子植物育种. 2017(04)
[6]A detailed procedure for CRISPR/Cas9-mediated gene editing in Arabidopsis thaliana[J]. Wenshan Liu,Xiaohong Zhu,Mingguang Lei,Qingyou Xia,Jose Ramon Botella,Jian-Kang Zhu,Yanfei Mao. Science Bulletin. 2015(15)
[7]文心兰类原球茎的愈伤组织诱导及其植株再生[J]. 黄霞,卢禹. 广西植物. 2016(09)
[8]PEG介导番木瓜叶肉原生质体瞬时表达体系的建立[J]. 霍鹏,言普,沈文涛,周鹏. 分子植物育种. 2015(04)
[9]CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术研究进展[J]. 李聪,曹文广. 生物工程学报. 2015(11)
[10]CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术的研究进展[J]. 郑小梅,张晓立,于建东,郑平,孙际宾. 生物技术进展. 2015(01)
博士论文
[1]基于CRISPR/Cas9的拟南芥多基因编辑及其在基因功能研究中的应用[D]. 刘玟杉.重庆大学 2015
[2]CRISPR/Cas9基因定点突变体系构建与大豆抗旱相关gma-miR160功能研究[D]. 孙现军.西北农林科技大学 2015
[3]甜瓜果实发育相关基因的鉴定、表达特性及功能分析[D]. 高峰.内蒙古大学 2013
[4]番茄中茉莉酸与其他激素信号的相互作用研究[D]. 贾承国.浙江大学 2009
硕士论文
[1]文心兰离体培养优化及转化铁氧还蛋白基因研究[D]. 吴晓佩.福建农林大学 2017
[2]利用CRISPR/Cas9技术编辑甘蓝基因的初步研究[D]. 马存发.西南大学 2017
[3]CRISPR/Cas9介导的大豆基因组定点编辑研究[D]. 蔡宇鹏.中国农业科学院 2016
[4]文心兰乙烯代谢相关基因克隆与表达及ACO功能验证[D]. 李玲.福建农林大学 2014
[5]铁棍山药类原球茎诱导增殖及植株再生的研究[D]. 李纪强.河南师范大学 2013
[6]转基因兰花培养物继代保持及文心兰ACO基因克隆与表达分析[D]. 林鹤延.福建农林大学 2012
[7]根癌农杆菌介导ACS反义基因转化文心兰的研究[D]. 金苹.福建农林大学 2009
[8]番茄LeEIN2基因的克隆及其功能研究[D]. 汪佳.重庆大学 2006
本文编号：2924181
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2924181.html
最近更新
教材专著
