烟草DXS及FPS双基因克

发布时间：2020-12-22 01:30

　　萜类化合物在植物代谢产物中种类繁多,除了在植物生长、发育、杀虫、避食、防御等方面有着重要的生理和生态作用外,大多成分还具有应用价值。近年来人们的研究重点逐渐转移到对其生物合成途径中关键酶的研究。关键酶一般位于合成途径的分支处,催化各种中间体以及后续产物的合成。有效调控某些关键酶的合成与表达,可以相应提高有关萜类化合物的产量。本实验主要对萜类合成途径中关键酶基因DXS和FPS进行克隆及生物信息学分析,构建p BI121-DXS、p BI121-FPS和p BI121-DXS-FPS过表达载体,通过烟草遗传转化进行基因表达和茄尼醇含量分析,探讨茄尼醇代谢的调控机制。主要获得以下研究结果:1.首次从普通烟草K326中克隆得到1-脱氧-木酮糖-5-磷酸合成酶（DXS）的完整编码区序列,长2142 bp,并较全面地对DXS基因与蛋白序列进行了生物信息学分析,结果表明其与枸杞、马铃薯、番茄、辣椒等的一致性在85%以上;该酶属于亲水性蛋白,没有信号肽及跨膜结构域,预测其具有叶绿体转运肽并定位于叶绿体,含有保守结构域TPP_synthase_N、TPP_... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：105 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 烟草萜类化合物代谢的研究进展
    1.1 植物中的萜类化合物
    1.2 类萜类生物合成途径的研究进展
    1.3 类萜类合成途径中关键酶DXS和FPS的研究进展
        1.3.1 DXS酶的研究进展
        1.3.2 FPS酶的研究进展
    1.4 茄尼醇的研究
        1.4.1 茄尼醇分离、提取及含量检测的研究进展
        1.4.2 茄尼醇生物代谢途径及关键酶的研究
    1.5 研究目的及意义
    1.6 研究内容
    1.7 技术路线
第二章 烟草K326 DXS、FPS基因的克隆及表达模式分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 实验方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 烟草K326 DXS基因的克隆及生物信息学分析
        2.2.2 烟草K326 FPS基因的克隆及生物信息学分析
        2.2.3 DXS、FPS基因 3’RACE克隆
        2.2.4 DXS、FPS基因的表达模式分析
    2.3 讨论
第三章 植物表达载体的构建
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 植物表达载体PBI121-DXS、PBI121-FPS的构建
        3.2.2 植物表达载体PBI121-DXS-FPS的构建
    3.3 讨论
第四章 烟草转化及茄尼醇含量分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 实验方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 农杆菌转化
        4.2.2 转基因烟草
        4.2.3 转基因烟草的PCR检测
        4.2.4 转基因烟草的DXS、FPS Real-Time PCR结果分析
        4.2.5 茄尼醇含量检测分析
    4.3 讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
附录



本文编号：2930886