CRISPR/Cas9系统在本氏烟草基因敲除中的应用

发布时间：2020-12-24 05:37

　　CRISPR（clustered regulatory interspersed short palindromic repeat）/Cas9（CRISPR associated proteins）是源于原核生物的一种获得性免疫系统,广泛应用于细菌、真菌、动物和植物的基因编辑研究中。本研究是以转基因本氏烟草16C（16C transgenic Nicotiana benthamiana,16C-NB）为材料,利用CRISPR/Cas9技术实现对其GFP（green fluorescent protein）基因的编辑工作,使用PCR-RE（polymerase chain reaction-restriction enzyme）的方法检测了突变体,建立了本氏烟草CRISPR/Cas9基因敲除瞬时表达系统,进而探讨了CRISPR/Cas9系统在植物基因敲除中的应用。在本研究中,采用In-Fusion克隆技术获得了操作性强的中间载体,针对靶基因GFP设计特定靶位点并进行了基因突变实验,为将来开展其它植物内源基因的生物学功能研究提供了参考。 

【文章来源】：分子植物育种. 2017年01期 北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 通过In-Fusion技术改造psg R-Cas9-At载体
    1.2 GFP基因的克隆
    1.3 预测靶位点
    1.4 GFP基因CRISPR/Cas9编辑载体的构建
    1.5 重组子亚克隆到p Cambia 1300-nluc植物双元表达载体
    1.6 转化农杆菌并侵染本氏烟草
    1.7 GFP基因编辑效率的检测
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 材料
    3.2 GFP基因的克隆
    3.3 GFP基因在p GEM-Tesay载体中的克隆
    3.4 靶标位点的确定
    3.5 In-Fusion克隆技术改造psg R-Cas9-At载体
    3.6 GFP guide序列在psg R-Cas9-IF-At载体中的克隆
    3.7 构建植物表达载体
    3.8 转化农杆菌及侵染本氏烟草
    3.9 编辑效率的检测
作者贡献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文编号：2935086