SPGE技术优化及在溪荪花色调控相关基因表达研究中的应用

发布时间：2020-12-30 01:36

　　本实验以溪荪（Iris sanguinea）和白花溪荪（Iris sanginea f.albiflora）为研究材料,首先对从国外引进的用于mRNA直接提取的固相基因提取技术进行研究优化;其次,根据溪荪转录组数据库,运用RT-PCR方法从花瓣中分离出ANS、DFR、3GT基因,并对其进行生物信息学分析;最后将优化后的固相基因提取技术应用到ANS、DFR、3GT基因表达特性分析中探究花色呈色调控相关机理,其研究主要成果如下:（1）优选出价格便宜且操作更加简便快捷的国产探针（0.16*7mm,06Cr19Ni10）替代进口探针（0.14*6mm,0Cr18Ni9）应用于固相基因提取技术,并发明了探针处理使用的新型玻璃瓶固定架（专利号为ZL201720392787.X）和新型探针放置架（专利号为ZL201720192234.4）两项实用新型专利,其优化后的操作流程为:探针的预处理:依次用适量正丁烷、丙酮、乙醇分别清洗探针15min,80℃烘干箱烘干,之后加入固定比例的（3-糖氧丙基）三甲氧基硅烷、二甲苯、二异丙基乙胺混合液于80℃烘干箱孵化培养4h;探针的包埋:用适量乙酸乙酯清洗孵化培养后... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１探针提取溪荪ＲＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｐｒｏｂｅ?ｅｘｔｒａｃｔｓ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｉ．?ｓａｎｇｕｉｎｅａ??

２．２．１不同规格探针对ＲＮＡ提取质量的影响??２．２．１．１试验材料??固相基因提取技术优化所选用的实验探针如图２－２所示，分为０．２２＊５＿、??０．１６＊７ｍｍ、０．１４＊６ｍｍ、０．２５＊１３ｍｍ?四种规格，２?号为进口针，材质为?０Ｃｒｌ８Ｎｉ９，其余??三种为国产针，材质为〇６Ｃｒｌ９ＮｉｌＯ。３号和４号探针可直接用手拿取，操作更加方便??快捷，而１号和２号探针则需要使用镊子夹取探针，其余试验材料同２．１．１。??■｜ｎ??图２－２不同规格的探针??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｐｒｏｂｅ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ??２．２．１．２试验方法??固相基因提取技术操作流程同２．１．２，其中预处理操作中探针孵化培养时间为１２ｈ，??－１２－??

１０Ｏｂｐ?Ｕ＿??图２－７不同浓度Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５对ＲＮＡ提取质量的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｑｕａｌｉｔｙ?ｏｆ?ＲＮＡ??Ｍ：?ＤＮＡ?标准分子量；ＣＫ：阴性对照；１：?ｌｎＭ０１ｉｇｏｄｔ２５，ＰＣＲ产物；２：?３ｎＭ０１ｉｇｏｄｔ２５，??ＰＣＲ?产物；３：?５ｎＭ０１ｉｇｏｄｔ２５，?ＰＣＲ?产物．??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?２０００；?ＣＫ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?１：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?１?｜＾Ｍ?Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５；?２：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?３｜ｉＭ??Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５；?３?：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?５｜ｘＭ?Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５．??２．３．６贮存条件及时间优化??将优化处理后的探针置于干净的ＰＣＲ管中，并置于封口袋中抽真空密封保存至４°Ｃ??冰箱中，分别于０ｄ、７ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄ后取出提取溪荪叶片ＲＮＡ，以此为模板反转??录成ｃＤＮＡ?—条链，经ＰＣＲ扩增后的产物，１％琼脂糖凝胶电泳结果如图２－８所示，条??带１?（０ｄ）、２?（７ｄ）、３?（１４ｄ）亮度基本一致，条带４?（２１ｄ）亮度略有降低，条带５??（２８ｄ）


本文编号：2946719