氟尿嘧啶通过抑制Bcl-xL表达诱导结肠癌BRAF基因V600E突变细胞的凋亡
发布时间：2021-01-07 04:56
结肠癌的发病率和致死率居高不下,严重危害我国人民的生命健康,为社会保障制度造成严重负担。化疗是进展期的结肠癌尤其是转移性结肠癌的主要治疗方法,目前仍基于伊立替康或奥沙利铂结合氟尿嘧啶/亚叶酸等小分子药物治疗方式,平均生存期仅有18个月。BRAF作为丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）途径的重要一环,是人类最重要的原癌基因之一,调控肿瘤细胞增殖、分化、迁移、存活和血管生成。BRAF基因突变所致的结肠癌在进展期结肠癌中约占10%,其化疗效果较差,缺乏最佳治疗方案,整体生存期显著少于BRAF基因未突变患者,且化疗后的耐药、复发和转移成为患者死亡的主要原因,是目前结肠癌化疗的面临的主要挑战之一。虽然BRAF靶向抑制剂在BRAF基因突变的结肠癌患者治疗的初期可取得较好的疗效,但是在治疗后期MAPK信号通路的再活化可导致进一步的耐药和不良预后。因此,深入研究和探讨BRAF基因突变所致化疗耐药的相关靶点和分子机制,并筛选相关靶向干预药物,有望实现对该类结肠癌亚型患者精准有效治疗,并将有效提高BRAF基因突变结肠癌患者的生存期。研究表明转移性结肠癌中绝大多数BRAF基因突变所致是由于600位密码子A和T发...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度氟尿嘧啶处理对BRAF野生型或突变型细胞活性及死亡影响
第三章实验结果23图3.2氟尿嘧啶处理对BRAF野生型或突变型细胞凋亡的影响及定量A．流式细胞术检测氟尿嘧啶在5μg/ml和10μg/ml处理BRAF野生型或突变型细胞24h的细胞凋亡情况；B．利用Graphpad6.0软件对图A进行定量并绘制细胞凋亡率柱状图。*P<0.05(Student’st-test,twotailed).WTvsMut.3.2BRAF基因V600E突变能显著增强氟尿嘧啶引起的线粒体凋亡明确细胞凋亡在BRAF基因V600E突变对氟尿嘧啶的重要作用后，探究线粒体凋亡对该过程中扮演的角色。线粒体凋亡通路即内在凋亡通路可以对存活因子、细胞应激和损伤等细胞信号最先做出响应，顾名思义该通路的核心就是线粒体，线粒体的褶皱内膜间隙贮存多种促凋亡因子，这些因子一旦释放，就会触发细胞凋亡。线粒体外膜透化取决于促凋亡的Bax/Bak蛋白与抗凋亡蛋白的Bcl2/Bcl-xL之间的平衡，每个BH3成员都充当不同信号通路的末端效应子对这些蛋白的活性进行正向或负向调节[79-81]。3.2.1BRAF基因V600E突变对氟尿嘧啶引起的凋亡通路caspase表达的影响为探索氟尿嘧啶作用于BRAF突变型结肠癌细胞的敏感性的分子机制，利用WesternBlot分子生物学方法检测凋亡通路执行者CleavedCaspase-3、CleavedCaspase-8、CleavedCaspase-9蛋白表达水平。结果发现，氟尿嘧啶在BRAF突变型和野生型细胞中引起一定程度的Caspase-3和Caspase-9裂解，而并未引起Caspase-8裂解（图3.3A）。经过裂解带灰度值统计结果，突变型和野生型结肠癌细胞中Caspase-3和Caspase-9激活程度不同，有统计学差异（图3.3B）。由此可见Caspase-3是由Caspase-9激活，而并非Caspase-8。因此，我们可以得出结论
第三章实验结果24氟尿嘧啶对BRAF突变型细胞凋亡是通过线粒体凋亡途径实现，也是由于线粒体凋亡通路激活程度不同导致对氟尿嘧啶的敏感性差异的结果。而后，我们将着眼于Caspase-3/-9上游通路研究。图3.3BRAF基因V600E突变对氟尿嘧啶引起的凋亡通路caspase表达的影响A.WesternBlot分子生物学方法检测凋亡通路执行者CleavedCaspase-3、CleavedCaspase-8、CleavedCaspase-9蛋白表达水平；B-D.利用Graphpad6.0软件对CleavedCaspase-3、CleavedCaspase-8、CleavedCaspase-9表达水平进行定量并绘制相应柱状图。*P<0.05(Student’st-test,twotailed).WTvsMut.
本文编号：2961955
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度氟尿嘧啶处理对BRAF野生型或突变型细胞活性及死亡影响
第三章实验结果23图3.2氟尿嘧啶处理对BRAF野生型或突变型细胞凋亡的影响及定量A．流式细胞术检测氟尿嘧啶在5μg/ml和10μg/ml处理BRAF野生型或突变型细胞24h的细胞凋亡情况；B．利用Graphpad6.0软件对图A进行定量并绘制细胞凋亡率柱状图。*P<0.05(Student’st-test,twotailed).WTvsMut.3.2BRAF基因V600E突变能显著增强氟尿嘧啶引起的线粒体凋亡明确细胞凋亡在BRAF基因V600E突变对氟尿嘧啶的重要作用后，探究线粒体凋亡对该过程中扮演的角色。线粒体凋亡通路即内在凋亡通路可以对存活因子、细胞应激和损伤等细胞信号最先做出响应，顾名思义该通路的核心就是线粒体，线粒体的褶皱内膜间隙贮存多种促凋亡因子，这些因子一旦释放，就会触发细胞凋亡。线粒体外膜透化取决于促凋亡的Bax/Bak蛋白与抗凋亡蛋白的Bcl2/Bcl-xL之间的平衡，每个BH3成员都充当不同信号通路的末端效应子对这些蛋白的活性进行正向或负向调节[79-81]。3.2.1BRAF基因V600E突变对氟尿嘧啶引起的凋亡通路caspase表达的影响为探索氟尿嘧啶作用于BRAF突变型结肠癌细胞的敏感性的分子机制，利用WesternBlot分子生物学方法检测凋亡通路执行者CleavedCaspase-3、CleavedCaspase-8、CleavedCaspase-9蛋白表达水平。结果发现，氟尿嘧啶在BRAF突变型和野生型细胞中引起一定程度的Caspase-3和Caspase-9裂解，而并未引起Caspase-8裂解（图3.3A）。经过裂解带灰度值统计结果，突变型和野生型结肠癌细胞中Caspase-3和Caspase-9激活程度不同，有统计学差异（图3.3B）。由此可见Caspase-3是由Caspase-9激活，而并非Caspase-8。因此，我们可以得出结论
第三章实验结果24氟尿嘧啶对BRAF突变型细胞凋亡是通过线粒体凋亡途径实现，也是由于线粒体凋亡通路激活程度不同导致对氟尿嘧啶的敏感性差异的结果。而后，我们将着眼于Caspase-3/-9上游通路研究。图3.3BRAF基因V600E突变对氟尿嘧啶引起的凋亡通路caspase表达的影响A.WesternBlot分子生物学方法检测凋亡通路执行者CleavedCaspase-3、CleavedCaspase-8、CleavedCaspase-9蛋白表达水平；B-D.利用Graphpad6.0软件对CleavedCaspase-3、CleavedCaspase-8、CleavedCaspase-9表达水平进行定量并绘制相应柱状图。*P<0.05(Student’st-test,twotailed).WTvsMut.
本文编号：2961955
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