中华绒螯蟹肌肉生长发育关键基因（MSTN）的分子功能与育种功能初步研究

发布时间：2021-01-08 01:52

　　肌肉的生长发育与中华绒螯蟹的蜕壳和躯体增长存在紧密联系。本文对中华绒螯蟹不同蜕壳阶段（蜕壳前期D、蜕壳期E、蜕壳后期A和蜕壳间期C）的肌肉进行组织学观察,以及蜕壳前后（D、A）肌肉进行了比较转录组学分析的基础上,筛选出了肌肉发育的正、负调控候选基因和关键调控基因（MSTN）。然后采用RNAi技术对此关键基因（MSTN）进行初步的分子功能研究。同时,通过大样本检测了MSTN基因的单核苷酸多态性（SNP）和生长性状的相关性,探讨了该基因作为分子育种功能的可行性。论文的具体研究结果如下:一、中华绒螯蟹步足肌肉生长发育的关键基因发掘为探讨中华绒螯蟹蜕壳前后肌肉组织的表观变化和基因表达差异,挖掘肌肉生长发育的关键基因,本章实施了四个具体蜕壳时期(蜕壳前期D_3-4、蜕壳期E、蜕壳后期A_2d和蜕壳间期C_10d)的步足肌肉的组织学观察和含水量测定,以及蜕壳前期（D）和蜕壳后期（A）的肌肉转录组分析。结果发现:蜕壳前期的肌纤维直径和横截面积最大,蜕壳后期最小,其大小顺序均为D>E>C>A,相互间存在极显著差异（P<... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同蜕壳时期第三步足肌肉的组织学观察

图 1.4 蜕壳前期和后期的转录组 GO 分类O categories analysis of the transcriptome from pre-molt and post-molCR 验证分别从不同蜕壳时期（D、A）选取 4 个和肌肉发育相关PCR 验证。前期高表达的基因（POMT、NEB2、ZCIA 和育负向调控相关，而后期高表达的基因（TITIN，MTOR，XR的正调控基因。验证结果发现：转录组分析结果和差异表P＜0.01）如图（1.5），表明本实验的转录组数据的可靠度较证发现：在中华绒螯蟹蜕壳前后，肌肉对蜕壳活动的响应生物学过程，其体现在蜕壳前肌肉的萎缩和蜕壳后肌肉POMTlevelNEB2

进一步分析序列的核苷酸变异后发现了 3 个 SNP（分别为 C714T、G729A 和 G753T）突变位点（图3.1），均为同义突变，将其命名为 S1、S2、S3。通过读取突变位点的测序峰值进行等位基因的纯杂合分型，TC 基因型峰值图为 T/C 套峰，GA 基因型峰值图为G/A 套峰，GT 基因型峰值图为 G/T 套峰；峰值图为单峰的均为对应基因型的纯合子。T/C G/A G/TS1 S2 S3图 3.1 中华绒螯蟹的肌肉抑制素基因（MSTN）SNP 位点分型Fig 3.1 SNP genotype of the MSTN gene in Chinese mitten crab2.2 MSTN 基因 SNP 位点的多态性分析本研究 3 个位点的观测杂合度与期望杂合度基本相等，经 χ2检验, 均处于Hardy-Weinberg 平衡(P>0.05)，具体遗传变异情况如表 3.1 所示。根据中度多态性原则（0.25<PIC<0.50）， 3 个群体中 3 个 SNP 位点表现为中、高度多态性(PIC＞0.25)。


本文编号：2963671