小鼠海马神经元细胞系中Purα基因敲除后对DNA损伤的修复作用的影响

发布时间：2021-01-09 01:41

　　目的人神经系统中尤为重要的转录因子Purα,是体内一个重要的转录因子,不只在神经系统,在体内的许多环节中都有很重要的作用,它与神经元的发育,突触形成都有很密切的关系。本文通过建立Purα基因敲除的小鼠海马神经元细胞系来观察其在DNA损伤修复中的作用。方法1)CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建以及鉴定:依据目的基因靶向去除外显子的位置来设计相对应的sgRNA序列,合成相应的寡核苷酸后克隆在pSpCas9（BB）-2A-Puro（pX459）V2.0质粒载体相对应的位点上,挑选阳性克隆进行酶切和测序鉴定;2)稳定细胞系的建立及鉴定:将克隆好的CRISPR/Cas9-Purα质粒转染到小鼠海马神经元（HT22）细胞中,加入嘌呤霉素进行抗性筛选,保留正常生长的细胞进行培养,运用RT-PCR和Western blot技术分别检测mRNA和蛋白质的表达水平以了解Purα基因的表达情况;3)Purα在DNA损伤修复中的作用:分别用羟基脲（HU）处理细胞,通过Western blot、脉冲电场反转凝胶电泳实验及细胞毒性实验观察Purα在DNA损伤修复中的作用。结果测序的结果证实所插入片段相位正确... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一部分 ：应用CRISPR/Cas9技术构建Purα基因敲除质粒及细胞系
    前言
    材料
    方法
    实验结果
    讨论
    结论
    参考文献（References）
第二部分 ：Purα在DNA损伤与修复中的研究
    前言
    方法
    实验结果
    讨论
    结论
    参考文献（References）
综述
    参考文献
致谢
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本文编号：2965719