羊口疮病毒陕西分离株B2L基因的克

发布时间：2021-01-09 04:35

　　为了对羊口疮病毒（ORFV）陕西分离株B2L基因进行克隆、序列分析及原核表达,根据GenBank已登录的ORFV（JN565694.1）B2L基因序列,设计合成一对特异性引物,应用PCR技术扩增ORFV B2L基因,并将目的基因连接到原核表达载体pET-28a中,成功构建重组质粒PET28a-B2L,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞进行诱导表达,并进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明,成功克隆了ORFV陕西分离株B2L全基因序列,核苷酸序列分析表明,陕西分离株B2L基因与国内外已报道的ORFV毒株核苷酸同源性超过97.3%,氨基酸同源性超过95.0%。重组菌经IPTG诱导后成功表达分子质量约为42ku的重组蛋白,该蛋白能与羊口疮阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。研究结果为ORFV的分子生物学特性研究提供资料,为进一步研制ORFV单克隆抗体及抗体检测ELISA试剂盒奠定了基础。 

【文章来源】：动物医学进展. 2016,37(12)北大核心

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒、菌种、质粒和细胞株
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 血清
    1.2 方法
        1.2.1 引物的设计及病毒核酸的提取
        1.2.2 B2L基因的克隆及序列分析
        1.2.3 重组蛋白B2L的诱导表达及表达条件优化
        1.2.4 重组蛋白B2L表达形式的分析
        1.2.5 目的蛋白的Western blot分析
2 结果
    2.1 PCR扩增结果
    2.2 重组质粒pET-B2L双酶切鉴定结果
    2.3 B2L目的基因同源性及进化树分析
    2.4 B2L基因编码氨基酸亲水性及抗原表位分析
    2.5 重组蛋白诱导表达条件的优化
    2.6 重组蛋白B2L表达形式的分析
    2.7 重组蛋白的Western blot分析
3 讨论
    3.1 B2L序列分析
    3.2 亲水性、抗原表位分析
    3.3 B2L蛋白原核表达分析


【参考文献】：
期刊论文
[1]口疮病毒XC13株的分离鉴定[J]. 邓宇.  中国兽医科学. 2015(05)
[2]羊口疮病毒B2L基因克隆及表达[J]. 赵文博,李瑞航,贺鹏亮,李朋娅,王梦醒,杨春华,于永忠,崔玉东.  黑龙江八一农垦大学学报. 2015(02)
[3]杨凌某羊场羊口疮病毒的分离鉴定[J]. 张瑜,高晶晖,张立强,高洋,贾云晓,陈德坤.  动物医学进展. 2015(01)
[4]羊口疮病毒新疆流行株的分离鉴定及其遗传进化分析[J]. 杨海波,孟庆玲,乔军,才学鹏,贺志昊,刘昱成,彭叶龙,王国超,陈创夫,都曼·努尔坎杰.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(02)
[5]羊口疮病毒分子生物学的研究进展[J]. 闫丰超,邵佳,窦永喜.  中国兽医科学. 2013(01)

硕士论文
[1]杨凌地区羊口疮流行病学调查、病毒分离鉴定及相关基因的生物信息学分析[D]. 刘方.西北农林科技大学 2014



本文编号：2965982