基于CRISPR基因编辑技术的小鼠原发胃癌模型建立

发布时间：2021-01-10 12:57

　　胃癌是最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率在全球居于第五和第三,中国也是胃癌大国,仅次于肺癌。目前用于胃癌研究的小鼠原发性肿瘤模型造模时间长,成功率低。随着CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤造模中的广泛应用,针对肺癌、肝癌等的小鼠原发肿瘤模型可以快速、高效建立,帮助揭示了不同类型肿瘤发生发展的分子机制,但基于CRISPR技术的小鼠原发性胃癌模型未见报导。本研究将34个抑癌基因的sg RNA文库以及Cas9基因通过胃黏膜高压注射导入胃部细胞,利用CRISPR/Cas9技术体内编辑抑癌基因,大约7周内诱导了胃癌的形成;利用免疫组化和PCR靶向扩增子二代测序等技术和方法,分析肿瘤结节、对应的癌旁组织、肿瘤原代细胞及单克隆,构建其抑癌基因编辑突变图谱,发现在肿瘤组织中胃癌常见的抑癌基因发生了高频率的突变,包括p53,Arid1a,Apc,Smad4,Pten等。根据突变图谱,进一步从34个抑癌基因sg RNA文库中选出12个sg RNA组装成一个小文库,这个小文库也能在3个月内成功诱导胃部肿瘤的形成,其中p53、Arid1b、Smad4和Pten也发生了高频突变,特别是在两个不同文库诱导成... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

靶向抑癌基因文库信息

浙江大学硕士学位论文正文结果26图2CRISPR技术成功诱导小鼠产生胃癌（A.实验组和对照组小鼠胃部解剖大体观图，5-8号小鼠为对照组小鼠（绿色文本），9-12号小鼠为实验组小鼠（红色文本）；B.实验组和对照组小鼠胃黏膜高压注射后体重变化折线图；C.实验组和对照组小鼠胃部肿瘤体积（1/2和肿瘤宽度2×肿瘤长度）差异图；D.肿瘤

浙江大学硕士学位论文正文结果28图3CRISPR诱导小鼠产生胃癌的免疫组化结果3.4胃癌靶向基因编辑图谱本研究通过对产生肿瘤的癌旁组织，肿瘤组织和对应的原代细胞进行PCR扩增子二代深度测序来分析靶向位点的编辑情况，为了避免测序误差的影响，本研究排除了基因编辑位点的编辑频率小于5%的情况。总共测序12个样本，其中4个癌旁组织，4个肿瘤组织和对应的原代肿瘤细胞（图4A）。就9号小鼠所产生的癌旁组织（NT9）,肿瘤组织（T9）和原代细胞（C9）而言（图4B），发生靶向编辑的个数占总位点的个数的比率分别为5.9%（2/34），82.35%（28/34）和79.41%（27/34）。样本NT9的Arid1b（100%）和Mlh1（21.95%）发生了编辑；T9除Apc、Atm、Axin1、Chd1、Fbxw7和Rps6ka3未发生编辑外，其余位点均


本文编号：2968747