二倍体马铃薯遗传转化体系的建立及S-RNase基因编辑的研究

发布时间：2021-01-12 21:23

　　马铃薯是最重要的块茎类粮食作物。栽培马铃薯以四倍体为主,但是四倍体遗传和薯块繁殖增加了马铃薯改良的难度。因此越来越多的科学家呼吁在二倍体水平进行马铃薯的再驯化,将马铃薯驯化成种子繁殖作物。但是二倍体马铃薯存在着自交不亲和的现象,使得一些优秀基因不能交流,则是二倍体育种的一个重大难题。植物基因工程技术可以通过直接基因定点突变来打破自交障碍实现自交亲和,从而为实现二倍体育种提供原材料。本文对二倍体马铃薯CIP 703541的柱头进行转录组测序,对测序结果进行拼接,利用参考基因组DM的S-RNase序列对拼接结果进行比对,成功扩增2条全新的S-RNase序列。并设计构建附带有NPT II基因和GFP基因的CRISPR/cas9表达载体对农杆菌介导的二倍体马铃薯的遗传转化体系进行摸索,对S-RNase进行敲除。其中包括预培养时间、再生阶段植物激素浓度、愈伤再生的卡那霉素筛选浓度以及抗性芽生根培养的卡那霉素筛选浓度的探究。结果表明:（1）预培养时间以2天最适合侵染。（2）再生阶段的植物激素浓度为玉米素:2.0mg·L^-1+萘乙酸0.01 mg·L^-1时... 

【文章来源】：云南师范大学云南省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

S-likeRNase与S-RNases所组成的进化树

图 2.2 获得的 S-RNase 氨基酸序列与 3 条已知全长 S-RNase 氨基酸序列比对Figure 2.2 alignment of the acquired S-RNase amino acid sequence with 3 known S-RNasesequence

图 3.1 pKSE402 载体图Figure 3.1 the pKSE402 vector3.2 方法质粒 DNA 提取SE402 质粒提取按照 TIANGEN 质粒 DNA 提取试剂盒说明书进行：加 600 μL 的平衡液 BL 与 CP3 与进行润洗，12000 rpm 离心 30 s，倒集管中的平衡液 BL，备用。从平板上挑取大肠杆菌单菌落接种于 5 mL 含 50 mg·L-1Kan 的 LB 液养基的玻璃摇菌管中，37℃、200 rpm 培养过夜。把过夜培养的大肠杆菌加入离心管中，12000 rpm 离心 1 min，去掉培

【参考文献】：
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本文编号：2973571