猪源多杀性巴氏杆菌保护性抗原基因体外重组表达及免疫效果研究
发布时间：2021-01-13 20:04
多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P.multocida）是导致中国生猪产业中主要的一种细菌性疾病,主要引起猪肺炎,萎缩性鼻炎。由于P.multocida血清型众多,且各血清型之间的交叉保护尚不明确,因此尚需对P.multocida的抗原类型、免疫机制等进行更深入的研究。本次课题选用OmpA、OmpH、plpP和plpE四个保护性抗原作为研究对象,体外重组表达并配制成亚单位疫苗,以小鼠为实验动物进行免疫攻毒保护试验,为进一步探索、开发猪源多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗研提供资料积累。1、本试验采用PCR方法,以本实验室保存的PmA8.1菌株DNA为模板克隆了OmpA、OmpH、plpP和plpE四个保护性抗原基因,并构建至pET-28（a）载体中,获得了pET28-OmpA、pET28-OmpH、pET28-plpE和pET28-plpP四个重组表达质粒,将体外表达重组蛋白用铝胶佐剂、弗氏佐剂和ISA201佐剂分别配制成亚单位疫苗接种免疫小鼠进行攻毒实验,结果显示,四个重组质粒分别转化大肠杆菌BL21（DE3）后,经诱导表达OmpA、OmpH、plpE均为包涵体表达...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
plpP和OmpH保护性抗原基因PCR扩增图
plpP、plpE及OmpH阳性转化子鉴定结果
15图2-1plpP和OmpH保护性抗原基因PCR扩增图Fig.2-1protectiveantigensgeneofplpPandOmpHwereamplifiedbyPCR1：plpP；2：OmpH；M：DL2000DNAMarker2.3.2重组质粒构建与阳性转化子鉴定结果①将扩增的plpP和OmpH的产物经PCR清洁后与pET-28用、BamHⅠ和SacⅠ双酶切后经琼脂糖电泳结果如下：图2-2plpP、OmpH和pET-28质粒双酶切结果Fig.2-2plpP、OmpHandpET-28a(+)Plasmiddoubledigestionresults1：plpP酶切后；2：OmpH酶切后；3：pET-28酶切后；M：DL2000DNAMarker②用pET-28通用引物对挑选的疑似阳性转化子进行PCR鉴定，电泳结果显示扩增条带均与预期目的条带相符，从左至右顺序分别是BL21（DE3）-pET28-plpP、BL21（DE3）-pET28-plpE、BL21（DE3）-pET28-ompH，如图2-3。图2-3plpP、plpE及OmpH阳性转化子鉴定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]多杀性巴氏杆菌免疫逃避机制[J]. 邹灵秀,朱剑宗,潘雨,邓彦飞. 畜牧与兽医. 2018(10)
[2]羊源致病性柠檬酸杆菌4种佐剂灭活疫苗的免疫效果比较[J]. 薛云,李静,王臣,司丽芳,王玉琴,刘志军,李健,廖成水,赵战勤. 中国预防兽医学报. 2018(08)
[3]禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的克隆表达及抗原性鉴定[J]. 陈翠腾,程龙飞,刘荣昌,万春和,傅光华,陈珍,朱春华,黄瑜. 福建农业学报. 2018(05)
[4]重组猪多杀性巴氏杆菌MetQ诱导小鼠抗攻毒感染的免疫保护力研究[J]. 伍小松,罗艳辉,余兴龙,贺建华,赵墩. 农业生物技术学报. 2017(10)
[5]多杀性巴氏杆菌IbeB重组蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力[J]. 伍小松,余兴龙,贺建华,赵墩. 中国兽医科学. 2017(05)
[6]湖南地区猪源多杀性巴氏杆菌部分保护性抗原基因分子流行病学调查[J]. 马攀,方超,李润成,胡玉立,赵墩,余兴龙. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[7]铝佐剂的特性及其研究进展[J]. 岳卓,赵玉秀,王辉. 中国生物制品学杂志. 2016(12)
[8]新型兽用疫苗佐剂研究进展[J]. 杨飞. 山东畜牧兽医. 2016(12)
[9]多杀性巴氏杆菌毒素的研究进展[J]. 方仁东,雷桂花,杜慧慧,彭远义. 中国兽医学报. 2016(11)
[10]青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫效果研究[J]. 张红见,李小兵,戚睿斌,赵静. 黑龙江畜牧兽医. 2016(13)
博士论文
[1]猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学与致病性研究[D]. 汤细彪.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]我国部分省区猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学调查[D]. 王豪男.华中农业大学 2017
[2]2型猪链球菌5种抗原与LTB和FLIC的融合表达及免疫原性研究[D]. 岑静.湖南农业大学 2017
[3]湖南省猪源多杀性巴氏杆菌血清型鉴定及F型的致病性研究[D]. 方超.湖南农业大学 2017
[4]猪多杀性巴氏杆菌保护性抗原筛选及小鼠免疫效果评估[D]. 马攀.湖南农业大学 2017
[5]猪多杀性巴氏杆菌保护性抗原筛选[D]. 郝杰.湖南农业大学 2015
[6]猪多杀性巴氏杆菌PlpB与Fur基因融合表达及免疫效果评价[D]. 蒋惠婷.黑龙江八一农垦大学 2014
[7]大肠杆菌LTB联合EV71亚单位疫苗VP1鼻腔免疫效果评价[D]. 谢婷婷.重庆医科大学 2014
[8]以大肠杆菌LTB为载体的PEDV亚单位疫苗及其佐剂研究[D]. 黄春娟.南京农业大学 2014
[9]猪源多杀性巴氏杆菌plpE基因的克隆、原核表达及其免疫原性研究[D]. 黄海燕.四川农业大学 2012
[10]猪多杀性巴氏杆菌分离鉴定及其PMT毒素免疫原性研究[D]. 张军虎.华中农业大学 2011
本文编号：2975483
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
plpP和OmpH保护性抗原基因PCR扩增图
plpP、plpE及OmpH阳性转化子鉴定结果
15图2-1plpP和OmpH保护性抗原基因PCR扩增图Fig.2-1protectiveantigensgeneofplpPandOmpHwereamplifiedbyPCR1：plpP；2：OmpH；M：DL2000DNAMarker2.3.2重组质粒构建与阳性转化子鉴定结果①将扩增的plpP和OmpH的产物经PCR清洁后与pET-28用、BamHⅠ和SacⅠ双酶切后经琼脂糖电泳结果如下：图2-2plpP、OmpH和pET-28质粒双酶切结果Fig.2-2plpP、OmpHandpET-28a(+)Plasmiddoubledigestionresults1：plpP酶切后；2：OmpH酶切后；3：pET-28酶切后；M：DL2000DNAMarker②用pET-28通用引物对挑选的疑似阳性转化子进行PCR鉴定，电泳结果显示扩增条带均与预期目的条带相符，从左至右顺序分别是BL21（DE3）-pET28-plpP、BL21（DE3）-pET28-plpE、BL21（DE3）-pET28-ompH，如图2-3。图2-3plpP、plpE及OmpH阳性转化子鉴定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]多杀性巴氏杆菌免疫逃避机制[J]. 邹灵秀,朱剑宗,潘雨,邓彦飞. 畜牧与兽医. 2018(10)
[2]羊源致病性柠檬酸杆菌4种佐剂灭活疫苗的免疫效果比较[J]. 薛云,李静,王臣,司丽芳,王玉琴,刘志军,李健,廖成水,赵战勤. 中国预防兽医学报. 2018(08)
[3]禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因的克隆表达及抗原性鉴定[J]. 陈翠腾,程龙飞,刘荣昌,万春和,傅光华,陈珍,朱春华,黄瑜. 福建农业学报. 2018(05)
[4]重组猪多杀性巴氏杆菌MetQ诱导小鼠抗攻毒感染的免疫保护力研究[J]. 伍小松,罗艳辉,余兴龙,贺建华,赵墩. 农业生物技术学报. 2017(10)
[5]多杀性巴氏杆菌IbeB重组蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力[J]. 伍小松,余兴龙,贺建华,赵墩. 中国兽医科学. 2017(05)
[6]湖南地区猪源多杀性巴氏杆菌部分保护性抗原基因分子流行病学调查[J]. 马攀,方超,李润成,胡玉立,赵墩,余兴龙. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[7]铝佐剂的特性及其研究进展[J]. 岳卓,赵玉秀,王辉. 中国生物制品学杂志. 2016(12)
[8]新型兽用疫苗佐剂研究进展[J]. 杨飞. 山东畜牧兽医. 2016(12)
[9]多杀性巴氏杆菌毒素的研究进展[J]. 方仁东,雷桂花,杜慧慧,彭远义. 中国兽医学报. 2016(11)
[10]青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫效果研究[J]. 张红见,李小兵,戚睿斌,赵静. 黑龙江畜牧兽医. 2016(13)
博士论文
[1]猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学与致病性研究[D]. 汤细彪.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]我国部分省区猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学调查[D]. 王豪男.华中农业大学 2017
[2]2型猪链球菌5种抗原与LTB和FLIC的融合表达及免疫原性研究[D]. 岑静.湖南农业大学 2017
[3]湖南省猪源多杀性巴氏杆菌血清型鉴定及F型的致病性研究[D]. 方超.湖南农业大学 2017
[4]猪多杀性巴氏杆菌保护性抗原筛选及小鼠免疫效果评估[D]. 马攀.湖南农业大学 2017
[5]猪多杀性巴氏杆菌保护性抗原筛选[D]. 郝杰.湖南农业大学 2015
[6]猪多杀性巴氏杆菌PlpB与Fur基因融合表达及免疫效果评价[D]. 蒋惠婷.黑龙江八一农垦大学 2014
[7]大肠杆菌LTB联合EV71亚单位疫苗VP1鼻腔免疫效果评价[D]. 谢婷婷.重庆医科大学 2014
[8]以大肠杆菌LTB为载体的PEDV亚单位疫苗及其佐剂研究[D]. 黄春娟.南京农业大学 2014
[9]猪源多杀性巴氏杆菌plpE基因的克隆、原核表达及其免疫原性研究[D]. 黄海燕.四川农业大学 2012
[10]猪多杀性巴氏杆菌分离鉴定及其PMT毒素免疫原性研究[D]. 张军虎.华中农业大学 2011
本文编号：2975483
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