家族性肾性糖尿致病基因SLC5A2与肾糖阈的相关性及RNA剪接分析

发布时间：2021-01-16 11:12

　　研究目的:家族性肾性糖尿（FRG）是一种罕见的肾小管疾病,其特征是孤立的持续性葡萄糖尿,无糖代谢异常和任何其他近端肾小管功能障碍的症状。绝大多数FRG患者由SLC5A2基因（OMIM182381）突变所致。本研究旨在进一步扩大FRG患者的SLC5A2基因突变分析,探讨基因型与肾糖阈（RTG）之间的联系。再者,基于所报道的SLC5A2外显子变异缺乏mRNA水平的研究,本研究也探索了点突变对前体mRNA剪接的影响。研究方法:1检测9个FRG家系25位家庭成员的24小时尿葡萄糖定量和肾葡萄糖阈值。PCR法扩增SLC5A2全部编码区及其侧翼序列,直接测序法分析基因突变特点。比较不同基因型患者（杂合子和复合杂合子;c.886（-10_-31）del杂合子和其他杂合子）肾糖阈的差异。2运用生物信息学在线软件（BDGP和HSF 3.1）预测人类基因突变数据库（HGMD,2019.01）已经报道的假定的SLC5A2错义突变,筛选对经典剪接位点和剪接调控序列如外显子剪接增强子（ESEs）和外显子剪接沉默子（ESSs）有潜在影响的点突变。采用构建迷你基因的方法验证候选外显子突变对剪接的... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２本研宄中的复合杂合突变与杂合突变患者以及ｃ．８８６（－１０＿－３１＞ｄｅｌ与其他杂合突变患者间肾??

图３本研宄中纳入的从Ｃ５Ａ错义变异的位置和迷你基因的示意图

结果??内含子序列（距３号外显子５’末端的内含子序列大小：５５ｂｐ，距３号外显子３’末端??的内含子序列大小：２０３ｂｐ）及相应的突变型迷你基園。野生型（ｐＳＰＬ３Ｅｘ３）和突??变型（ｃ．２１６Ｃ＞Ａ和ｃ．２９４Ｃ＞Ａ）迷你基因被转染入ＨＥＫ２９３Ｔ细胞中ＲＴ－ＰＣＲ实验??结果示，对照组产生２条电泳带（３６８?ｂｐ的含有３号外甚子的条带，２６３?ｂｐ不含该??外显子的条带），而两个突变型的均只产生一条２６３?ｂｐ的条带（图５）?直接测序??结果表明２６３?ｂｐ的条带为ｐＳＰＬ３载体上两个０有的外显子序列。因此，这两个突变??均导致３号外显子的跳跃。ｍＲＮＡ转录本中缺失３号外显子将导致ＳＧＬＴ２蛋白缺??失３５个氣基酸（第６７－１０１位氨基酸），但并不引起开放阅读框的移码突变。我们??考虑ｃ．２１６Ｃ＞Ａ和ｃ．２９４Ｃ＞Ａ突变产生剪接突变的原＿为突变所在的３号外显子存在??较弱的剪接供点（得分〇．〇〇，ＢＤＧＰ分析），相应位．点的突变导致ＥＳＥｓ的破坏及??ＥＳＳｓ的形成，ＥＳＳｓ招募ｈｎＲＮＰＡｌ，抑制临近剪接位点的识别力量和剪接效应，进??而抑制剪接识别力＿＾最终导致３号外显子跳跃。??５００ｂｐＢ??ｂｐ?２５０?ｂｐ?■??１００?ｂｐ?｜??Ｂ?／?Ｃ?，＼???ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?５＊?ｉ?＜ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?３’???ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?５＊?ｊ?ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?３’???ＣＴＣＴＡＧＡＧＴＣＧＡＣＣＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧ?６?ＡＧＡＴＣＴＣＣＣＧＡＧＧＧ?Ｃ?ＴＣＴＡＧＡＧＴＣＧＡＣＣＣＡ６?ＣＡＡＣＣＴＧ?ＧＡＧＡＴＣＴＣＣＣＧＡＧＧＧ??ＷＴ?Ｂ?Ｅｘ３?ＫＢ


本文编号：2980727