三种病毒性出血热荧光与可视化基因芯片检测方法的建立

发布时间：2021-01-16 12:00

　　病毒性出血热（Viral hemorrhagic fevers, VHFs）常由4种科的心A病毒引起,均以发热和出血为主要症状。目前,大多数病毒性出血热无有效疫苗及治疗药物。克里米亚-刚果出血热（Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF）是一种由克里米亚-刚果出血热病毒（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV）引起经蜱传播的病毒性疾病,在非洲,亚洲,欧洲南部,中东的30多个国家都有感染病例的报道。裂谷热（Rift Valley fever, RVF）是由裂谷热病毒（Rift Valley fever virus, RVF V）引起一种人畜共患病。该病在非洲、中东及也门地区流行,危害人身安全和畜牧业发展。拉沙热（Lassa fever,LF）是一种由拉沙病毒（Lassa fever virus, LAV）引起的病毒性出血热,在西非呈地方性流行。由于该病传染性强,在其他欧美国家也有输入性病例报道。目前,病毒分离、血清学试验、分子生物学检测是VHFs的主要实验室检测方法。病毒分离,费时、费力,不适宜在疫区外开... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
第一章 前言
    1.1 病毒性出血热的概况
    1.2 克里米亚-刚果出血的概况
        1.2.1 CCHFV的基因组结构及功能
        1.2.2 CCHFV的实验室检测
    1.3 裂谷热的概况
        1.3.1 RVFV的基因组结构及功能
        1.3.2 RVFV的实验室检测
    1.4 拉沙热的概况
        1.4.1 LAV的基因组结构及功能
        1.4.2 LAV的实验室检测
    1.5 基因芯片技术的概况
    1.6 基因芯片技术的应用
    1.7 纳米金颗粒的概述
    1.8 纳米金颗粒在基因芯片技术中的应用
    1.9 研究的目的与意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 质粒与病毒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 耗材与设备
    2.2 方法
        2.2.1 实验技术路线
        2.2.2 三种病毒基因序列的比对及人工合成
        2.2.3 探针与引物的设计
        2.2.4 主要溶液的配制
        2.2.5 检测样本的提取
        2.2.6 建立多重PCR体系
        2.2.7 荧光基因芯片的制备
        2.2.8 杂交条件的优化
        2.2.9 可视化基因芯片的制备
        2.2.10 特异性试验
        2.2.11 敏感性试验
        2.2.12 重复性试验
第三章 结果与分析
    3.1 CCHFV、RVFV、LAV的目的基因合成结果
    3.2 引物设计结果
    3.3 探针设计结果
    3.4 探针特异性评价
    3.5 病毒cDNA的PCR鉴定
    3.6 杂交条件的优化结果
        3.6.1 杂交时间的优化结果
        3.6.2 杂交温度的优化结果
    3.7 荧光基因芯片杂交结果
    3.8 可视化基因芯片杂交结果
    3.9 两种基因芯片检测方法特异性验证结果
    3.10 两种基因芯片检测方法灵敏性检测结果
    3.11 两种基因芯片检测方法重复性验证结果
第四章 讨论
    4.1 两种基因芯片的比较分析
    4.2 探针的设计影响检测的特异性和杂交效率
    4.3 微阵列的制备
    4.4 杂交试验的优化
    4.5 标记系统影响杂交效率
    4.6 检测结果的灵敏性分析
第五章 结论
参考文献
致谢
研究生期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒性出血热实验室检测[J]. 庞正,李德新.  病毒学报. 2013(03)



本文编号：2980791