大鼠骨髓基质细胞体外培养及CEMP1基因转染研究

发布时间：2021-01-20 00:33

　　目的:体外培养大鼠骨髓基质细胞（rat bone marrow stromal cells,rBMSCs）,构建携带人牙骨质蛋白（cementum?protein,CEMP）1基因的慢病毒载体并转染rBMSCs,探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs生物学行为的影响。方法:1.全骨髓贴壁法体外分离培养rBMSCs,通过成骨和成脂分化能力以及细胞表面标志物检测对rBMSCs进行鉴定;2.构建含人CEMP1基因的重组慢病毒过表达载体,通过RT-PCR及基因测序对重组载体进行鉴定;3.通过荧光显微镜观察转染后细胞荧光表达,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR、Real-time PCR、免疫细胞化学和Western Blot检测转染后细胞CEMP1基因和蛋白的表达情况;4.通过检测转染后rBMSCs的成牙骨质相关基因表达,探讨CEMP1基因修饰对rBMSCs的影响。结果:1.成功分离培养rBMSCs;流式细胞术显示细胞高表达CD29和CD90;2.rBMSCs成骨诱导21 d,茜素红染色可见红染的矿化结节;成脂诱导21 d,油红O染色可见红染的空泡样脂滴;3.RT-PCR及基因测序证实成功构建... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

rBMSCs培养形态学观察A：rBMSCs原代培养3d(×200)；B：rBMSCs原代培养7d(×200)；C：rBMSCs原代培养

图 1-2 流式细胞术鉴定 rBMSCs 表面标志物A：CD29；B：CD31；C：CD45；D：CD90Fig.1-2 Detection of rBMSCs surface markers by flow cytometryA: CD29 B: CD31 C: CD45 D: CD901.3 成骨分化能力检测成骨诱导后第 7 d，rBMSCs 细胞形态出现明显改变，生长密集、重叠，呈铺路石样外观，可见逐渐形成的结节状结构。成骨诱导第 21 d，镜下可见白色的矿化结节，细胞以结节为中心密集生长（图 1-3A），茜素红染色可见红染的、散在的、大小不一的矿化结节（图 1-3B）。

图 1-2 流式细胞术鉴定 rBMSCs 表面标志物A：CD29；B：CD31；C：CD45；D：CD90Fig.1-2 Detection of rBMSCs surface markers by flow cytometryA: CD29 B: CD31 C: CD45 D: CD90分化能力检测导后第 7 d，rBMSCs 细胞形态出现明显改变，生长密集、重叠，可见逐渐形成的结节状结构。成骨诱导第 21 d，镜下可见白胞以结节为中心密集生长（图 1-3A），茜素红染色可见红染的一的矿化结节（图 1-3B）。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2987998