利用RNA干扰技术沉默稻纵卷叶螟几丁质合成酶B基因
发布时间：2021-01-21 09:02
世界上有大半以上的人口将稻米作为主食,水稻作为全球最主要的粮食和经济作物之一,病虫害的防治一直以来都是一件至关重要的事情。稻纵卷叶螟（Cnaphalocrocis medinalis）主要以包括水稻在内的众多禾本科植物叶片为食,因此也是对此类农作物危险相当严重的害虫之一。几丁质合成酶（chitin synthase）是昆虫体内几丁质合成通路上至关重要的一个酶,在昆虫生长发育周期中扮演着十分重要的角色,因此这个酶也常被科研工作者作为研究对象。本论文的主要目的是通过RT-PCR结合RACE技术克隆并分析稻纵卷叶螟几丁质合成酶B基因（CmCHSB）的全长cDNA序列。再利用植物转基因RNAi技术,获得对CmCHSB具有明显抗虫效果的转基因水稻植株。通过稻纵卷叶螟取食这种转基因植株后的发育障碍和致死效应,从而达到利用安全有效的生物防治方法来防治稻纵卷叶螟。本研究的主要研究结果如下:1.稻纵卷叶螟几丁质合成酶B基因的克隆及表达谱本研究起初运用RT-PCR方法扩增出稻纵卷叶螟开放阅读框部分片段,然后再利用RACE-PCR技术扩增出CmCHSB的全长cDNA。然后将这两部分所获得的序列片段拼接得到稻...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
稻纵卷叶螟总RNA琼脂糖凝胶电泳Fig.2.1AgarosegelelectrophoresisoftotalRNAfromC.medinalis
图 2.2 稻纵卷叶螟 CmCHSB cDNA 的扩增Fig. 2.2 The amplification products of CmCHSB from Cnaphalocrocis medinalisA：CmCHSB 的中间片段产物；B：CmCHSB 的 5'RACE 扩增产物；C：CmCHSB 的 3'RACE 扩增产物；M1：DL 2000 DNA marker；M2：DL 10000 DNA markerA: The intermediate product of CmCHSB; B: 5'RACE product of CmCHSB; C: 3'RACE product of CmCHSB;M1：DL 2000 DNA marker；M2：DL 10000 DNA marker通过蓝白斑平板的筛选，把克隆成功的阳性菌落（图 2.3）准确地挑出来。
图 2.5 部分鳞翅目昆虫几丁质合成酶不氨基酸序列比对Fig. 2.5 Alignment of amino acids residues of chitin synthase B in different Lepidoptera insects用于比对的几丁质合成酶 B 来源物种及 GenBank 登录号请参见表 2.19The source species and accession numbers for protein sequences used in alignment analysis are presented in Table2.19
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用RNA干扰技术沉默稻纵卷叶螟几丁质合成酶A基因[J]. 李娇,杜娟,李尚伟. 山地农业生物学报. 2016(03)
[2]稻纵卷叶螟海藻糖酶基因的克隆、分子特性和表达分析[J]. 田宇,杜娟,李尚伟,李娇,王爽. 昆虫学报. 2016(06)
[3]转基因植物及其产品的应用价值和安全风险展望[J]. 梁靓,李毅然. 食品安全质量检测学报. 2015(11)
[4]稻纵卷叶螟几丁质合成酶及合成通路相关酶基因的鉴定及表达分析[J]. 余海中,黄克慧,汪婉玲,刘明辉,杨鑫,张彦,徐家萍. 应用昆虫学报. 2015(05)
[5]亚洲玉米螟几丁质合成酶B（CHSB）启动子序列克隆与分析[J]. 杨晨,鲁新,王振营,席景会,潘怡欧,毕锐,彭天飞,尚庆利. 环境昆虫学报. 2015(04)
[6]重组RNA干扰表达载体的构建与鉴定[J]. 田宇,杜娟,李尚伟. 山地农业生物学报. 2015(03)
[7]显微注射构建烟粉虱的RNAi技术体系[J]. 李如美,王少丽,张友军. 应用昆虫学报. 2015(02)
[8]中华稻蝗几丁质脱乙酰基酶1基因的分子特性及功能[J]. 丁国伟,于荣荣,杨美玲,马恩波,杨静,张建珍. 昆虫学报. 2014(11)
[9]常见的植物转基因技术及方法研究进展[J]. 徐丽萍,刘树英,于淼,刘洪章. 北方园艺. 2014(20)
[10]植物转基因技术研究进展[J]. 骆翔,刘志颐,章树民,申硕,王德福,王劲松. 中国农学通报. 2014(15)
博士论文
[1]利用RNAi技术沉默褐飞虱中肠基因的研究[D]. 闸雯俊.武汉大学 2012
硕士论文
[1]东亚飞蝗几丁质合成酶基因的分子特性及功能研究[D]. 刘晓健.山西大学 2010
[2]家蚕几丁质酶与几丁质合成酶的基因表达与功能研究[D]. 孔令斐.苏州大学 2010
[3]IPT基因遗传转化谷秆两用稻的研究[D]. 许明.福建农林大学 2003
本文编号：2990871
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：112 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
稻纵卷叶螟总RNA琼脂糖凝胶电泳Fig.2.1AgarosegelelectrophoresisoftotalRNAfromC.medinalis
图 2.2 稻纵卷叶螟 CmCHSB cDNA 的扩增Fig. 2.2 The amplification products of CmCHSB from Cnaphalocrocis medinalisA：CmCHSB 的中间片段产物；B：CmCHSB 的 5'RACE 扩增产物；C：CmCHSB 的 3'RACE 扩增产物；M1：DL 2000 DNA marker；M2：DL 10000 DNA markerA: The intermediate product of CmCHSB; B: 5'RACE product of CmCHSB; C: 3'RACE product of CmCHSB;M1：DL 2000 DNA marker；M2：DL 10000 DNA marker通过蓝白斑平板的筛选，把克隆成功的阳性菌落（图 2.3）准确地挑出来。
图 2.5 部分鳞翅目昆虫几丁质合成酶不氨基酸序列比对Fig. 2.5 Alignment of amino acids residues of chitin synthase B in different Lepidoptera insects用于比对的几丁质合成酶 B 来源物种及 GenBank 登录号请参见表 2.19The source species and accession numbers for protein sequences used in alignment analysis are presented in Table2.19
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用RNA干扰技术沉默稻纵卷叶螟几丁质合成酶A基因[J]. 李娇,杜娟,李尚伟. 山地农业生物学报. 2016(03)
[2]稻纵卷叶螟海藻糖酶基因的克隆、分子特性和表达分析[J]. 田宇,杜娟,李尚伟,李娇,王爽. 昆虫学报. 2016(06)
[3]转基因植物及其产品的应用价值和安全风险展望[J]. 梁靓,李毅然. 食品安全质量检测学报. 2015(11)
[4]稻纵卷叶螟几丁质合成酶及合成通路相关酶基因的鉴定及表达分析[J]. 余海中,黄克慧,汪婉玲,刘明辉,杨鑫,张彦,徐家萍. 应用昆虫学报. 2015(05)
[5]亚洲玉米螟几丁质合成酶B（CHSB）启动子序列克隆与分析[J]. 杨晨,鲁新,王振营,席景会,潘怡欧,毕锐,彭天飞,尚庆利. 环境昆虫学报. 2015(04)
[6]重组RNA干扰表达载体的构建与鉴定[J]. 田宇,杜娟,李尚伟. 山地农业生物学报. 2015(03)
[7]显微注射构建烟粉虱的RNAi技术体系[J]. 李如美,王少丽,张友军. 应用昆虫学报. 2015(02)
[8]中华稻蝗几丁质脱乙酰基酶1基因的分子特性及功能[J]. 丁国伟,于荣荣,杨美玲,马恩波,杨静,张建珍. 昆虫学报. 2014(11)
[9]常见的植物转基因技术及方法研究进展[J]. 徐丽萍,刘树英,于淼,刘洪章. 北方园艺. 2014(20)
[10]植物转基因技术研究进展[J]. 骆翔,刘志颐,章树民,申硕,王德福,王劲松. 中国农学通报. 2014(15)
博士论文
[1]利用RNAi技术沉默褐飞虱中肠基因的研究[D]. 闸雯俊.武汉大学 2012
硕士论文
[1]东亚飞蝗几丁质合成酶基因的分子特性及功能研究[D]. 刘晓健.山西大学 2010
[2]家蚕几丁质酶与几丁质合成酶的基因表达与功能研究[D]. 孔令斐.苏州大学 2010
[3]IPT基因遗传转化谷秆两用稻的研究[D]. 许明.福建农林大学 2003
本文编号：2990871
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2990871.html
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