结合线粒体COI基因的丝网印刷电极生物传感器应用于肉品鉴别技术探究
发布时间：2021-01-21 23:44
肉制品的安全和质量持续受到全社会关注。常用基于核酸的分析方法进行肉品鉴别等检验检疫工作。其中,DNA条形码技术是对传统分类方法的有力补充;在动物物种分类和鉴别工作中,线粒体细胞色素C氧化酶亚基I（COI）核酸序列是通用的条形码基因。纯粹的条形码技术通过同高灵敏、低成本、便携式的生物传感器相结合,可以有效解决条形码技术商业化发展和食品安全快速检测的问题。因此,本课题尝试搭建以动物线粒体COI基因为识别元件,以一次性丝网印刷生物传感器为器件的传感平台,通过对生猪肉、生牛肉、生羊肉和生鸡肉、生猪肉/牛肉混合二元物和市售样品探究,评价该传感平台的特异性、灵敏性和商业适用性等。主要工作开展如下:1.构建线粒体COI基因电化学生物传感平台的最优条件为.:探针与靶标序列最佳结合时间为45分钟,最佳杂交温度为45分钟;亚甲基蓝最佳工作浓度为1.5×10-5 M,最佳孵育时间为15分钟;生牛肉和生猪肉靶标序列在10-13-10-5 mol/L 范围内与还原峰电流线性关系良好,检测限分别为5.048×10-14M和3.491×10-14M。初步验证了构建的该电化学生物传感器有可行性。2.设计模拟生猪肉/牛...
【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２实时ＰＣＲ技术定量原理??Ｆｉｇ．１－２?Ｔｈｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｆｏｒ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??
ｎ等［６７］??通过对液滴数字ＰＣＲ?（ｄｄＰＣＲ）分析技术的探究，对羊肉中有鸡肉掺入的情况进行??了定量检测；同时，通过引入常数因子来转换在不同掺假比例下，拷贝数与混合肉类??比率的关系。与实时定量ＰＣＲ相比，在５－８０％的范围内ｄｄＰＣＲ分析技术的偏差小??于９％，证明ｄｄＰＣＲ技术在绝对定量分析中更准确。??Ａ?Ａ?厂￣￣??ｆ?厂ｖ?變取??①山?－ｆ?遇??麟?Ｄｒｏ辦?Ｒｅ？Ｊ？ｒ???ＤｆｏｐｋＫ?Ｇ？ｎ？ｆ＾ｙ???？「＿■??ｊ??图１－３Ｂ１０ＲＡＤＱＸ２００微滴式数字ＰＣＲ操作流程（Ａ）和８孔微滴生成板的安装（Ｂ）?ｌ６８］??Ｆｉｇ．１－３?Ｔｈｅ?ｏｐｅｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＢＩＯＲＡＤ?ＱＸ２００?ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ－ｄｉｇｉｔａｌ?ＰＣＲ?（Ａ）?ａｎｄ?ｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?８－ｈｏｌｅ??ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｏａｒｄ?（Ｂ）?１狀！未奴书签？］??虽然ｄＰＣＲ技术是非常有运用价值的ＤＮＡ定量检测技术，可以在微小反应体??系中达到高度检测精确度和灵敏性，以及实现高通检测，但是，正是由于整个检测过??程处于微体系中，对液滴的操控水平要求极高，如何实现稳定且高效的结果，是第三??代ＰＣＲ技术从实验基础研宄走向市场化亟需解决的问题。??１．２．３．４?ＤＮＡ条形码技术??加拿大动物学家Ｐａｕｌ?Ｈｅｂｅｒｔ等［６９］通过分析动物界超过１万种物种的线粒体细胞??色素Ｃ氧化酶亚基Ｉ?（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｃｏｘｄａｓｅｌ，ＣＯＩ）基因序列，发现９８％的物种种内??遗传距离差距小于２％，而种间差距却高达１１．３％；?Ｈｅｂｅ
?北京化工大学硕士研究生学位论文???［７９】通过使用条形码对美国超市里出售的５４种肉类进行错误标签的成功识别。??。，為一酵■?Ｈ??ＯｙｔｏｄｗｓＴＷ?ｃ?＜ｋ？ｒｍｎ?〇ｙ？！ｅｈｎａｍｅ?ｃＡ？＾ｓｗ？〇ｗ？?Ｏｎｎ？ｍ?ｔｍｍｔｔｉｂｉ?Ｏ＾ｘｍｋｍｉ?＾ｔａｍｍ??图１－５线粒体ＤＮＡ编码亚基（Ａ）和线粒体基因组图（Ｂ）??Ｆｉｇ．１－５?Ｔｈｅ?ｃｏｄｉｎｇ?ｓｕｂｕｎｉｔ?ｏｆ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ＤＮＡ?（Ａ）?ａｎｄ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ｇｅｎｏｍｅ?ｍａｐ?（Ｂ）??近年来，开发新型ＤＮＡ条码也有显著进展，逐渐发展出了第二代Ｃ＾Ａ条形码，??即复合ＤＮＡ条形码（ＤＮＡ?ｍｅｔａｂａｒｃｏｄｉｎｇ）以及微小ＤＮＡ条形码（ＤＮＡ??ｍｉｎｉｂａｒｃｏｄｉｎｇ）技术［８＿１］。ＭａｒｔｉｊｎＳｔａａｔｓ．等［８２】认为复合ＤＮＡ条形码技术是可以同??时用于检测复杂样品中的多种物种的技术，也可用于含有高度降解ＤＮＡ的深加工产??品的鉴别，现在主要被开发利用在鉴定传统医学中的濒危和危险物种［８３］；又如??Ｈａｊｉｂａｂａｅｉ等［８４］提出对于博物馆中易发生的历史标本等物质降解问题，可以运用??ｍｉｎｉ－ＤＮＡ条形码技术来解决，并且通过采用１００－２００?ｂｐ的短小条形码核酸片段，完??成了馆藏关于哥斯达黎加地区寄生蜂标本的鉴定工作。虽然，ＤＮＡ条形码技术的分??类结果真实可靠，是对数量庞大、分类特征性不强的传统物种鉴定技术的有力补充，??但是基于纯粹的ＤＮＡ分析方法存在流程繁琐、人力资源成本较高等不足，因此，要??实现ＤＮＡ条形码技术更加自动化和标准化的流程检测，就需要联用更加简便、低成
本文编号：2992112
【文章来源】：北京化工大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２实时ＰＣＲ技术定量原理??Ｆｉｇ．１－２?Ｔｈｅ?ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｆｏｒ?ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ??
ｎ等［６７］??通过对液滴数字ＰＣＲ?（ｄｄＰＣＲ）分析技术的探究，对羊肉中有鸡肉掺入的情况进行??了定量检测；同时，通过引入常数因子来转换在不同掺假比例下，拷贝数与混合肉类??比率的关系。与实时定量ＰＣＲ相比，在５－８０％的范围内ｄｄＰＣＲ分析技术的偏差小??于９％，证明ｄｄＰＣＲ技术在绝对定量分析中更准确。??Ａ?Ａ?厂￣￣??ｆ?厂ｖ?變取??①山?－ｆ?遇??麟?Ｄｒｏ辦?Ｒｅ？Ｊ？ｒ???ＤｆｏｐｋＫ?Ｇ？ｎ？ｆ＾ｙ???？「＿■??ｊ??图１－３Ｂ１０ＲＡＤＱＸ２００微滴式数字ＰＣＲ操作流程（Ａ）和８孔微滴生成板的安装（Ｂ）?ｌ６８］??Ｆｉｇ．１－３?Ｔｈｅ?ｏｐｅｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＢＩＯＲＡＤ?ＱＸ２００?ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ－ｄｉｇｉｔａｌ?ＰＣＲ?（Ａ）?ａｎｄ?ｉｎｓｔａｌｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?８－ｈｏｌｅ??ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ?ｂｏａｒｄ?（Ｂ）?１狀！未奴书签？］??虽然ｄＰＣＲ技术是非常有运用价值的ＤＮＡ定量检测技术，可以在微小反应体??系中达到高度检测精确度和灵敏性，以及实现高通检测，但是，正是由于整个检测过??程处于微体系中，对液滴的操控水平要求极高，如何实现稳定且高效的结果，是第三??代ＰＣＲ技术从实验基础研宄走向市场化亟需解决的问题。??１．２．３．４?ＤＮＡ条形码技术??加拿大动物学家Ｐａｕｌ?Ｈｅｂｅｒｔ等［６９］通过分析动物界超过１万种物种的线粒体细胞??色素Ｃ氧化酶亚基Ｉ?（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｃｏｘｄａｓｅｌ，ＣＯＩ）基因序列，发现９８％的物种种内??遗传距离差距小于２％，而种间差距却高达１１．３％；?Ｈｅｂｅ
?北京化工大学硕士研究生学位论文???［７９】通过使用条形码对美国超市里出售的５４种肉类进行错误标签的成功识别。??。，為一酵■?Ｈ??ＯｙｔｏｄｗｓＴＷ?ｃ?＜ｋ？ｒｍｎ?〇ｙ？！ｅｈｎａｍｅ?ｃＡ？＾ｓｗ？〇ｗ？?Ｏｎｎ？ｍ?ｔｍｍｔｔｉｂｉ?Ｏ＾ｘｍｋｍｉ?＾ｔａｍｍ??图１－５线粒体ＤＮＡ编码亚基（Ａ）和线粒体基因组图（Ｂ）??Ｆｉｇ．１－５?Ｔｈｅ?ｃｏｄｉｎｇ?ｓｕｂｕｎｉｔ?ｏｆ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ＤＮＡ?（Ａ）?ａｎｄ?ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ?ｇｅｎｏｍｅ?ｍａｐ?（Ｂ）??近年来，开发新型ＤＮＡ条码也有显著进展，逐渐发展出了第二代Ｃ＾Ａ条形码，??即复合ＤＮＡ条形码（ＤＮＡ?ｍｅｔａｂａｒｃｏｄｉｎｇ）以及微小ＤＮＡ条形码（ＤＮＡ??ｍｉｎｉｂａｒｃｏｄｉｎｇ）技术［８＿１］。ＭａｒｔｉｊｎＳｔａａｔｓ．等［８２】认为复合ＤＮＡ条形码技术是可以同??时用于检测复杂样品中的多种物种的技术，也可用于含有高度降解ＤＮＡ的深加工产??品的鉴别，现在主要被开发利用在鉴定传统医学中的濒危和危险物种［８３］；又如??Ｈａｊｉｂａｂａｅｉ等［８４］提出对于博物馆中易发生的历史标本等物质降解问题，可以运用??ｍｉｎｉ－ＤＮＡ条形码技术来解决，并且通过采用１００－２００?ｂｐ的短小条形码核酸片段，完??成了馆藏关于哥斯达黎加地区寄生蜂标本的鉴定工作。虽然，ＤＮＡ条形码技术的分??类结果真实可靠，是对数量庞大、分类特征性不强的传统物种鉴定技术的有力补充，??但是基于纯粹的ＤＮＡ分析方法存在流程繁琐、人力资源成本较高等不足，因此，要??实现ＤＮＡ条形码技术更加自动化和标准化的流程检测，就需要联用更加简便、低成
本文编号：2992112
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2992112.html
最近更新
教材专著
