RNA干扰介导的NUF-2基因表达下调对肝细胞癌增殖及细胞周期的影响

发布时间：2021-01-22 17:22

　　目的:研究NUF-2基因表达下调对肝细胞癌的增殖及细胞周期的影响。材料与方法:1.选定HepG2、BEL-7404、SMMC-7721、BEL-7402四种肝癌细胞株与正常肝细胞株HL-7702为研究目标,利用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检验NUF-2在上述细胞中的表达情况;2.挑选NUF-2高表达的肝癌细胞株,通过RNA干扰技术构建抑制NUF-2基因表达的慢病毒载体;3.用慢病毒感染选定的肝癌细胞株,获取NUF-2被稳定抑制表达的肝癌细胞株;4.通过qRT-PCR检测肝癌细胞中NUF-2 mRNA表达情况;5.通过Western blotting检验肝癌细胞抑制NUF-2表达后蛋白表达效果;6.通过Celigo细胞荧光计数法及MTT实验检测抑制NUF-2表达后肝癌细胞增殖能力的影响;7.通过流式细胞仪检测抑制NUF-2表达后肝癌细胞细胞周期的改变情况。结果:1.在4种人肝癌细胞系（SMMC-7721、HepG2、BEL-7404、BEL-7402）中NUF-2基因的表达:荧光实时定量PCR（qRT-PCR）实验结果显示,4种肝癌细胞系（HepG2、BEL-7404、SMMC-... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1-2pHelper1.0载体图谱图3.5.1-3pHelper2.0载体图谱

载体的构建、包装和稳定细胞株的筛选载体的构建验使用的是 GV115 载体，载体图谱如图 3.5.1-1。双酶切。使用的辅助质粒载体 pHelper1.0、pHelpe-2、3.5.1-3 所示：

第 4 章 实验结果4.1 在 4 种人肝癌细胞系中 NUF-2 基因的表达情况荧光实时定量 PCR（qRT-PCR）实验结果显示，4 种人肝癌细胞系NUF-2 mRNA 水平较正常人肝癌细胞 HL-7702 显著增高，其中以 SMM细胞的 mRNA 表达量最高，所以本实验选用 SMMC-7721 细胞作为抑制胞，见图 4.1-1。

【参考文献】：
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本文编号：2993619