紫花苜蓿高频体胚发生及萌发成苗技术与转基因应用
发布时间：2021-01-22 18:55
以紫花苜蓿的子叶或叶片为外植体,建立高频体胚发生及成苗技术体系,为苜蓿耐逆性状的遗传改良提供技术支撑。在愈伤诱导、体胚诱导、体胚成熟与萌发等几个关键环节,分析比较培养基组分对培养效果的影响。建立在SHDK培养基上诱导愈伤、MB（-/+）+ABA 0.4mg/L+PEG-6000 50g/L+蔗糖50g/L培养基上诱导体胚、Bio2Y培养基上促体胚发育成熟、1/2 MS（或SH）培养基上体胚萌发成苗的高频再生技术体系。最适条件下,每克胚性愈伤组织可产生77.9个正常萌发成苗的健康体胚。再生植株在生长箱内经过2周20℃、16h/d的光照培养后移栽温室,成活率达90%以上。利用该离体再生技术成功地将凝集素基因PPA导入苜蓿中,获得抗蚜转基因苜蓿。
【文章来源】：西北农业学报. 2017,26(06)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
图１不同培养基上的体胚诱导效果ａ．ＭＳＢＮ培养基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培养基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培养基ＭＢ（－）
体胚数也少。ＭＢ（－／＋）培养基［在ＭＢ（－）基础上ＫＮＯ３加倍］的体胚诱导效果较好，每一块愈伤组织都有体胚形成，且愈伤组织内部到后期亦有体胚形成；体胚数量也较其他３个处理明显增加（图１－ｄ），每克愈伤组织形成的体胚数平均为３９．５±６．２。ａ．ＭＳＢＮ培养基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培养基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培养基ＭＢ（－）ｍｅｄｉｕｍ；ｄ．ＭＢ（－／＋）培养基ＭＢ（－／＋）ｍｅｄｉｕｍ图１不同培养基上的体胚诱导效果Ｆｉｇ．１Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａ２．３体胚成熟与萌发将子叶型胚直接转移到ＭＳ０或１／２ＭＳ培养基上后，大部分体胚不能正常萌发成苗。部分胚状体子叶异常膨大后停止生长，或出现连体的子叶，或出现试管苗的玻璃化，或出现大量次级体胚，不能发育成完整的植株；有的胚状体膨大后出现脱分化重新愈伤化现象。据２个批次试验的调查统计，体胚正常萌发成苗的比率仅为５．８％（表２）。针对苜蓿体胚在ＭＳ０或１／２ＭＳ培养基上发生的玻璃化现象，采取将三角瓶放入光照培养箱以增加光强，提高琼脂质量浓度以提高培养基渗透压、降低容器湿度，使用透气透光好的封口膜降低ＮＨ＋４浓度，添加活性碳等措施，但效果均不明显。为此，借鉴黎茵等［２２］的方法，添加一个体胚成熟的液体培养过程，即将获得的体胚放入促进体胚成熟的液体培养基（ＳＨ基本盐＋Ｌ－Ｐｒｏｌｉｎｅ３．４５ｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１．６５ｇ／Ｌ＋蔗糖２０
【参考文献】：
期刊论文
[1]紫花苜蓿两种再生体系的优化及比较[J]. 王成龙,周美亮,董雪妮,唐益雄,邵继荣,吴燕民. 中国农业科技导报. 2015(04)
[2]转GsGST13/SCMRP基因双价苜蓿的耐盐性分析[J]. 吴婧,才华,柏锡,纪巍,魏正巍,唐立郦,赵阳,朱延明. 草业学报. 2014(01)
[3]6个紫花苜蓿栽培品种高效再生体系的建立[J]. 张丽,甘晓燕,王敬东,陈虞超,石磊,宋玉霞. 西北农业学报. 2013(08)
[4]转GsPPCK1基因苜蓿植株的获得及其耐碱性分析[J]. 魏正巍,朱延明,化烨,才华,纪巍,柏锡,王臻昱,文益东. 作物学报. 2013(01)
[5]基于漩涡振荡茎尖生长点转化法的Lyz-GFP双元基因在‘陇东苜蓿’中的转化和表达[J]. 王庭辉,马晖玲,史毅,安惠惠. 甘肃农业大学学报. 2012(05)
[6]聚乙二醇6000对杂花苜蓿体胚发生的影响及体胚的细胞学观察[J]. 杨国锋,毛雅妮,孙娟,张德罡,盛亦兵. 中国农学通报. 2010(18)
[7]Development of Alfalfa （Medicago sativa L.） Regeneration System and Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation[J]. ZHANG He, HUANG Qi-man and SU Jin Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2010(02)
[8]甘露醇、蔗糖和低温预处理对花楸体细胞胚诱导的影响[J]. 沈海龙,高翔翔,杨玲. 植物生理学通讯. 2008(04)
[9]不同基因型玉米幼胚愈伤组织的培养特性[J]. 郭新梅,张晓东,韩立新,陈耀锋. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(04)
[10]DREB2A基因对苜蓿遗传转化的研究[J]. 盛慧,朱延明,李杰,柏锡,才华. 草业科学. 2007(03)
本文编号：2993737
【文章来源】：西北农业学报. 2017,26(06)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
图１不同培养基上的体胚诱导效果ａ．ＭＳＢＮ培养基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培养基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培养基ＭＢ（－）
体胚数也少。ＭＢ（－／＋）培养基［在ＭＢ（－）基础上ＫＮＯ３加倍］的体胚诱导效果较好，每一块愈伤组织都有体胚形成，且愈伤组织内部到后期亦有体胚形成；体胚数量也较其他３个处理明显增加（图１－ｄ），每克愈伤组织形成的体胚数平均为３９．５±６．２。ａ．ＭＳＢＮ培养基ＭＳＤＮｍｅｄｉｕｍ；ｂ．ＭＳ０培养基ＭＳ０ｍｅｄｉｕｍ；ｃ．ＭＢ（－）培养基ＭＢ（－）ｍｅｄｉｕｍ；ｄ．ＭＢ（－／＋）培养基ＭＢ（－／＋）ｍｅｄｉｕｍ图１不同培养基上的体胚诱导效果Ｆｉｇ．１Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａ２．３体胚成熟与萌发将子叶型胚直接转移到ＭＳ０或１／２ＭＳ培养基上后，大部分体胚不能正常萌发成苗。部分胚状体子叶异常膨大后停止生长，或出现连体的子叶，或出现试管苗的玻璃化，或出现大量次级体胚，不能发育成完整的植株；有的胚状体膨大后出现脱分化重新愈伤化现象。据２个批次试验的调查统计，体胚正常萌发成苗的比率仅为５．８％（表２）。针对苜蓿体胚在ＭＳ０或１／２ＭＳ培养基上发生的玻璃化现象，采取将三角瓶放入光照培养箱以增加光强，提高琼脂质量浓度以提高培养基渗透压、降低容器湿度，使用透气透光好的封口膜降低ＮＨ＋４浓度，添加活性碳等措施，但效果均不明显。为此，借鉴黎茵等［２２］的方法，添加一个体胚成熟的液体培养过程，即将获得的体胚放入促进体胚成熟的液体培养基（ＳＨ基本盐＋Ｌ－Ｐｒｏｌｉｎｅ３．４５ｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１．６５ｇ／Ｌ＋蔗糖２０
【参考文献】：
期刊论文
[1]紫花苜蓿两种再生体系的优化及比较[J]. 王成龙,周美亮,董雪妮,唐益雄,邵继荣,吴燕民. 中国农业科技导报. 2015(04)
[2]转GsGST13/SCMRP基因双价苜蓿的耐盐性分析[J]. 吴婧,才华,柏锡,纪巍,魏正巍,唐立郦,赵阳,朱延明. 草业学报. 2014(01)
[3]6个紫花苜蓿栽培品种高效再生体系的建立[J]. 张丽,甘晓燕,王敬东,陈虞超,石磊,宋玉霞. 西北农业学报. 2013(08)
[4]转GsPPCK1基因苜蓿植株的获得及其耐碱性分析[J]. 魏正巍,朱延明,化烨,才华,纪巍,柏锡,王臻昱,文益东. 作物学报. 2013(01)
[5]基于漩涡振荡茎尖生长点转化法的Lyz-GFP双元基因在‘陇东苜蓿’中的转化和表达[J]. 王庭辉,马晖玲,史毅,安惠惠. 甘肃农业大学学报. 2012(05)
[6]聚乙二醇6000对杂花苜蓿体胚发生的影响及体胚的细胞学观察[J]. 杨国锋,毛雅妮,孙娟,张德罡,盛亦兵. 中国农学通报. 2010(18)
[7]Development of Alfalfa （Medicago sativa L.） Regeneration System and Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation[J]. ZHANG He, HUANG Qi-man and SU Jin Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2010(02)
[8]甘露醇、蔗糖和低温预处理对花楸体细胞胚诱导的影响[J]. 沈海龙,高翔翔,杨玲. 植物生理学通讯. 2008(04)
[9]不同基因型玉米幼胚愈伤组织的培养特性[J]. 郭新梅,张晓东,韩立新,陈耀锋. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(04)
[10]DREB2A基因对苜蓿遗传转化的研究[J]. 盛慧,朱延明,李杰,柏锡,才华. 草业科学. 2007(03)
本文编号：2993737
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