家蚕杆状病毒表达的鸡干扰素的应用和该病毒用于A型血友病基因治疗的研究

发布时间：2021-01-23 15:55

　　杆状病毒作为一种具有高效表达能力的分子生物学工具,在昆虫细胞及虫体中用于重组蛋白质的生产已有超过三十年的历史,并且相关技术仍然在持续改进。此外,杆状病毒还可作为基因呈递载体,用于将外源基因呈递至哺乳动物细胞及体内。由于哺乳动物体内没有任何病毒复制或其他潜在风险,杆状病毒作为基因呈递载体也越来越受到重视。本文利用实验室构建的禽类干扰素杆状病毒生产平台,成功表达了高活性鸡α（chIFN-α）、γ（chIFN-γ）以及λ（chIFN-λ3）干扰素,并使用鸡成纤维细胞（CEF）对各类鸡干扰素在抗禽类疾病,如新城疫（ND）的实际应用效果进行了验证,发现在各类干扰素组合中chIFN-γ抗NDV的效果最好。通过利用转录组测序技术对试验样品的分析发现,干扰素处理后细胞中多种干扰素诱导基因（ISGs）及参与抗原呈递的各类基因都呈显著上调表达,同时细胞自身也开始分泌chIFN-γ,这为chIFN-γ抗NDV的良好效果提供了分子水平的解释,也为chIFN-γ作为新型抗病毒药物及疫苗佐剂的应用提供了理论依据。同时根据预实验及相关文献报道,进一步应用家蚕杆状病毒表达平台所获得的chIFN-α及chIFN-γ对Ⅰ... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

三类干扰素的信号通路示意图

我们取96孔板试验中的最适干扰素浓度,利用细胞培养瓶对chIFN-γ的抗NDV活性进行了扩大重复试验,分别从NDV组,chIFN-γ+NDV组每12 h收集培养基上清,并利用q PCR对NDV的拷贝数进行检测。结果如图2-1所示:我们发现,在感染后24 h及36 h,病毒对照组及干扰素抑制组细胞培养基上清液中的病毒拷贝数差异达到了显著水平,证明chINF-γ对NDV的复制有很好的抑制作用。

为了探寻chINF-γ在抗NDV过程中所起的作用,我们将chINF-γ组(ChINF-γ),NDV感染组(NDV),ch INF-γ+NDV感染组(chIFN-γ_NDV),空白对照组(Control)的细胞在感染后20h全部收集,提取RNA进行了转录组测序。总计获得了超过70G的数据量,各组生物学重复之间相关性非常高(R2>0.97),质控及相关性分析结果如表2-2及图2-2所示:2.2.3 在干扰素抗NDV试验中不同组组别之间的差异表达基因

【参考文献】：
期刊论文
[1]Suppression of gastric cancer growth by baculovirus vector-mediated transfer of normal epithelial cell specific-1 gene[J]. Wei Huang, Sheng-Ping Hu, Biao Li, Department of Nuclear Medicine, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China Wei Huang, Xiang-Long Tian, Yun-Lin Wu, Jie Zhong, Li- Fen Yu, Department of Gastroenterology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(38)

硕士论文
[1]鸡干扰素α和γ在家蚕中的表达及其抗病毒活性检测[D]. 李皓洋.中国农业科学院 2015



本文编号：2995491