小鼠resistin基因表达载体的构建及在RAW264.7细胞的表达

发布时间：2021-01-23 18:37

　　目的构建小鼠resistin基因表达载体,并将其导入小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中,从而建立能够高表达resistin的单核巨噬细胞系。方法从小鼠脂肪组织提取mRNA,PCR后连接到真核表达载体进行测序验证,同时构建慢病毒载体,感染至RAW264.7细胞中,通过荧光显微镜观察是否转染成功,ELISA方法检测蛋白分泌水平。结果双酶切结果显示构建的质粒中有大小为345bp的resistin插入条带;经过测序及BLAST比对,插入序列与Genebank中resistin的小鼠CDS序列相同,没有移码突变;荧光显微镜观察病毒感染后的RAW264.7细胞,红色荧光比率达到70%;ELISA检测培养的感染细胞上清中resistin分泌显著增加。结论成功获得了能够分泌resistin蛋白的单核/巨噬细胞。 

【文章来源】：解剖科学进展. 2020,26(05)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 动物及细胞
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计
    1.4 目的基因resistin的扩增
    1.5 重组质粒的构建和检验
    1.6 电转
    1.7 病毒重组质粒的构建和检验
    1.8 病毒感染
    1.9 Raw264.7细胞培养上清中Resistin蛋白水平检测
    1.1 0 统计分析
2 结果
    2.1 重组质粒的检验
    2.2 重组质粒测序鉴定及电转
    2.3 病毒感染效率检测
    2.4 细胞外分泌resistin的检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及细胞中的表达及意义[J]. 马珺,薛一雪,巩威,朱璐,高丽丽,商秀丽.  解剖科学进展. 2017(06)



本文编号：2995724