利用cDNA-AFLP技术分离玉米盐胁迫响应相关基因

发布时间：2021-01-25 13:02

　　本研究选用3个强耐盐的玉米自交系为试验材料,通过盐胁迫试验,从中筛选出耐盐性最强的为玉米自交系M-2导入系,利用cDNA-AFLP技术分离不同盐胁迫下M-2导入系的差异表达基因,旨在为进一步研究玉米苗期的耐盐机理提供理论依据。主要研究结果如下:1、5个盐浓度胁迫下的M-2导入系、Hr30导入系和Mo17导入系的株高、生物量、叶绿素含量、净光合速率以及可溶性蛋白质的含量大体上随着盐浓度的增加而呈下降的趋势;根长、相对电导率、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性和根冠比大体上呈先上升后下降的趋势。2、利用主成分分析归纳出株高、净光合速率、丙二醛等9个与耐盐密切相关的指标,运用模糊数学隶属函数分析得出,3个玉米自交系的耐盐性强弱依次为M-2导入系>Hr30导入系>Mo17导入系。3、采用224对引物组合对4个不同浓度盐胁迫下的M-2导入系进行cDNA-AFLP分析。试验发现了532条TDFs,并验证了其中289条的真实性。根据TDFs差异表达情况将其分成8个类型,诱导型、中浓度诱导型、特定浓度诱导型、上调型、下调型、盐胁迫抑制型、中浓度抑制型和其他表达类型,并成功回收测... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
    1.1 导入系对盐胁迫的生理响应
        1.1.1 植物形态指标对盐胁迫的响应
        1.1.2 植物生理特性对盐胁迫的响应
    1.2 植物的抗盐的生理机制
        1.2.1 植物的耐渗透调节
        1.2.2 植物的耐离子调节
        1.2.3 抗氧化防御系统
        1.2.4 植物激素调节
    1.3 植物抗盐的分子机制
        1.3.1 离子区域化
        1.3.2 渗透调节
        1.3.3 抗氧化防御机制
    1.4 CDNA-AFLP技术
        1.4.1 cDNA-AFLP技术原理
        1.4.2 cDNA-AFLP技术在差异表达研究中的应用
    1.5 研究目的与意义
    1.6 技术路线
第二章 导入系对盐胁迫的生理响应
    2.1 供试材料
    2.2 试验设计
    2.3 测定项目及方法
        2.3.1 形态指标的测定
        2.3.2 生理指标的测定
    2.4 数据分析
    2.5 结果与分析
        2.5.1 盐胁迫对3个玉米自交系形态的影响
        2.5.2 盐胁迫对3个玉米自交系叶片叶绿素含量和Pn的影响
        2.5.3 盐胁迫对3个玉米自交系叶片电导率、MDA、可溶性蛋白及抗氧化酶活性的影响
        2.5.4 耐盐指标的相关性分析和方差分析
        2.5.5 3个玉米自交系耐盐指标间主成分分析
        2.5.6 隶属函数分析
    2.6 讨论
    2.7 小结
第三章 玉米苗期盐胁迫CDNA-AFLP分析
    3.1 试验材料
    3.2 盐胁迫处理
    3.3 试验方法
        3.3.1 总RNA的提取
        3.3.2 双链cDNA的合成
            3.3.2.1 第一链cDNA的合成
            3.3.2.2 双链cDNA的合成
        3.3.3 双链cDNA酶切及接头连接
            3.3.3.1 酶切
            3.3.3.2 接头的连接
        3.3.4 预扩增
        3.3.5 选择性扩增
        3.3.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
            3.3.6.1 电泳长、短板的准备及组装
            3.3.6.2 聚丙烯酰胺凝胶的制备及灌胶
            3.3.6.3 扩增产物聚丙烯酰胺凝胶电泳
            3.3.6.4 银染染色过程
        3.3.7 耐盐差异片段的回收与测序
            3.3.7.1 差异片段的回收
            3.3.7.2 再次PCR
            3.3.7.3 差异片段的琼脂糖回收
            3.3.7.4 差异片段与T载体的连接
            3.3.7.5 差异片段连接产物的平板转化
            3.3.7.6 菌液PCR阳性检测
            3.3.7.7 测序结果分析
        3.3.8 差异片段的Real-time qRT-PCR
    3.4 结果分析
        3.4.1 RNA的提取
        3.4.2 cDNA合成
            3.4.2.1 cDNA单链检测
            3.4.2.2 双链cDNA检测
        3.4.3 双链cDNA双酶切
        3.4.4 预扩增检测
        3.4.5 选择性扩增检测
        3.4.6 不同浓度盐胁迫下玉米的cDNA-AFLP差异表达分析
        3.4.7 盐胁迫相关TDF的分类
        3.4.8 玉米耐盐相关TDFs的回收测序
            3.4.8.1 差异片段的回收
            3.4.8.2 再次PCR
            3.4.8.3 DNA琼脂糖检测
            3.4.8.4 阳性菌的检测
        3.4.9 TDFs的功能注释
        3.4.10 部分差异条带qRT-PCR分析
    3.5 讨论
        3.5.1 玉米盐响应相关基因的生物学意义
            3.5.1.1 信号转导
            3.5.1.2 胁迫响应
            3.5.1.3 转录因子
    3.6 小结
第四章结论
    4.1 3个玉米自交系耐盐性评价
    4.2 盐胁迫相关基因的CDNA-AFLP分析
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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[5]小麦茉莉酸诱导蛋白基因TaJIP的克隆和功能鉴定[J]. 王飞,田雪军,赵月,臧新山,耿晓丽,倪中福,姚颖垠,胡兆荣,辛明明,张金波,丛花,孙其信,彭惠茹.  中国农业大学学报. 2015(02)
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硕士论文
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[2]盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆和表达分析[D]. 薛飞.大连海洋大学 2013
[3]花生对盐胁迫的适应性及其耐盐性评价[D]. 符方平.湖南农业大学 2013
[4]青花菜软腐病病程的cDNA-AFLP差异表达分析[D]. 张凤云.福建农林大学 2013
[5]新耐盐基因NHXFS1在烟草中的表达及其耐盐性分析[D]. 黄继斌.华东师范大学 2012
[6]玉米盐胁迫差异基因的分离[D]. 严定平.海南大学 2009
[7]棉花盐胁迫诱导cDNA文库的构建与筛选及棉花金属硫蛋白基因功能分析[D]. 薛彤彤.山东农业大学 2006



本文编号：2999270