紫花苜蓿转Bt基因材料的创制及转PeDREB2a和KcERF基因材料的生长分析

发布时间：2021-01-26 00:00

　　紫花苜蓿（Medicago sativa L.）具有适应性强、蛋白含量高、适口性好和营养价值高等特点,是全球栽培面积最大的优良牧草。由于我国草产业发展相对滞后,紫花苜蓿产量和种子严重不足,尽管进口量逐年增加,仍难满足市场需求。此外紫花苜蓿抗旱耐盐能力较弱,在干旱和盐渍化环境下难以生长,加之虫害的威胁,这严重制约了紫花栽培面积的扩大和产量的进一步提高。因此,利用分子育种手段培育兼具抗旱、耐盐和抗虫性状的紫花苜蓿新品种（系）,对促进我国草牧业发展具有重要意义。本研究主要分为两大部分:一是构建抗虫基因Bt的植物表达载体pCAMBIA3301-Bt cry1ac,分别转化拟南芥和紫花苜蓿;二是将共表达PeDREB2a和KcERF基因的中苜一号紫花苜蓿株系（Z6和Z7）和野生型（WT）植株定植到大田,进行株高、分枝数等表型分析,同时进行乙烯、吲哚乙酸和纤维素含量的测定和转录组测序分析。取得的主要研究结果如下:1.优化了中苜一号和甘农四号两个紫花苜蓿品种遗传转化体系:确定叶片为最佳外植体;MS培养基+0.2 mg/L 6-BA+4 mg/L 2,4-D为愈伤组织诱导的最佳培养基;2 mg/L为草铵... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pCAMBIA3301农杆菌菌液PCR鉴定

图 3-2 PPT 浓度为 0 和 5 mg/L 对愈伤诱导的影响igure 3-2 Effects of 0 and 5 mg/L PPT on callus induc度对叶片愈伤诱导的影响。愈伤组织受 PPT 15 d 逐渐显现，愈伤组织诱导率的结果为：15伤组织的诱导受到了一定的影响，培养 15 d 并最终死亡，最终诱导率为 66 %；浓度为 2 现象就相较明显，且愈伤诱导率显著下降 33 有褐化现象的外植体诱导率仅为 18 %；浓度为伤组织出现褐化现象，15 d 时几乎所有的外经死亡。因此选择 2 mg/L PPT 作为筛选浓度。表 3-11 不同 PPT 浓度对愈伤诱导的影响s of different concentrations of glufosinate-ammonium o度愈伤组织诱导率(%)

硕士学位论文 紫花苜蓿转 Bt基因材料的创制及转PeDREB2a 和KcERF 基因材料其进行 Bar 基因 PCR 鉴定。结果表明，有 15 株转基因中苜一号号扩增出特异性目的片段，其中 Bar 基因条带为 552 bp(图 3-3)，带，可初步说明含有 Bar 基因的植物表达载体 pCAMBIA3301 已经料中苜一号和甘农四号中。转化率分别为 48%和 46%。


本文编号：3000118