Dux基因在小鼠合子基因组激活过程中的作用研究

发布时间：2021-01-26 05:33

　　哺乳动物受精后,合子基因组转录处于沉默状态,胚胎着床前发育主要受控于母源物质。随着卵母细胞中母源物质降解,新形成的胚胎基因组将发生大规模转录,这一事件被称为合子基因组激活（Zygotic genome activation,ZGA）。作为母源-合子转换的关键环节,ZGA是受精后发生的重要生物学事件。对胚胎的正常发育至关重要。深入了解ZGA事件,将有助于克服胚胎体外发育阻滞问题,从而为辅助生殖技术在临床实际应用扫除障碍。为研究Dux基因在小鼠早期胚胎发育,特别是在ZGA过程中的作用。首先利用RT-qPCR和免疫荧光技术检测Dux和Zscan4、MERVL、Eif1a等ZGA相关基因在早期胚胎发育各个时期的表达情况,结果表明Dux的mRNA在早期胚胎发育各时期均可被检测到,但在2-细胞时期表达量最高;与mRNA表达不同的是,Dux编码的蛋白仅能在2-细胞和4-细胞时期被检测到;作为ZGA事件的标志基因Zscan4、MERVL、Gm6763和Eif1a均呈现出在2-细胞特异性高表达,与Dux的表达模式相一致。为进一步研究Dux的作用,我们通过显微注射siRNA直接干扰Dux在受精卵中的表达,... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述 母源-合子转换过程中表观遗传的动态变化
    1 表观遗传变化
    2 与MZT相关的调控因子
第二章 实验研究 Dux基因在小鼠合子基因组激活过程中的作用研究
    前言
    1 材料
        1.1 仪器和设备
        1.2 耗材和实验动物
            1.2.1 耗材
            1.2.2 实验动物
        1.3 试剂及配制
            1.3.1 分子实验相关试剂
            1.3.2 免疫荧光相关试剂
            1.3.3 试剂配制
    2 试验方法
        2.1 实验设计
            2.1.1 Dux在小鼠植入前胚胎发育中的动态变化
            2.1.2 Dux对胚胎发育的影响
            2.1.3 验证Dux与 Zscan4 的作用关系
            2.1.4 数据统计
            2.1.5 Dux过表达小鼠的构建
        2.2 操作方法
            2.2.1 超数排卵
            2.2.2 受精卵和MII期卵母细胞的收集
            2.2.3 胚胎的体外培养
            2.2.4 实时荧光定量PCR操作
            2.2.5 胚胎免疫荧光染色
            2.2.6 胚胎的免疫印迹分析
            2.2.8 细胞转染
            2.2.9 双荧光素酶报告基因活性检测
            2.2.10 Dux过表达小鼠的鉴定
    3 结果
        3.1 Dux在植入前胚胎发育中的动态变化
            3.1.1 Dux在植入前胚胎发育中的表达模式
            3.1.2 ZGA相关基因在MII卵母细胞和植入前胚胎发育中的表达模式
        3.2 Dux对胚胎发育的影响
            3.2.1 Dux敲减效率检测
            3.2.2 Dux敲减后的胚胎发育情况
            3.2.3 Dux敲减后ZGA相关基因表达的影响
        3.3 验证Dux与 Zscan4 的作用关系
            3.3.1 LTR与 Zscan4 上游理论启动子区域序列比对的结果
            3.3.2 Dux表达载体构建
            3.3.3 萤火虫荧光素酶的构建
            3.3.4 双荧光素酶报告基因系统检测结果
        3.4 Dux过表达小鼠的鉴定
    4 讨论
    5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3000561