粘虫对氯虫苯甲酰胺抗性相关细胞色素P450的鉴定
发布时间：2021-01-27 11:44
粘虫Mythimna separata（Walker）是一种迁飞性、多食性、暴发性的世界性害虫,其已对多种杀虫剂产生了抗性。本文以玉米粘虫为研究对象,经过氯虫苯甲酰胺或氟虫腈处理粘虫3龄幼虫24 h后,构建转录组测序文库并进行Illumina RNA-seq测序,运用实时荧光定量PCR（qPCR）筛选出不同条件下最佳的内参基因及差异性表达的P450基因,并通过RNA干扰（RNAi）技术确定对杀虫剂具有解毒代谢功能的主效P450基因。具体研究结果如下:1.采用叶片浸渍法测定氯虫苯甲酰胺或氟虫腈对粘虫的毒力。结果表明氯虫苯甲酰胺或氟虫腈对粘虫3龄幼虫致死中浓度LC50分别为0.45和18.72 mg/L,对粘虫3龄幼虫的10%致死浓度LC10分别为0.15和13.66 mg/L。2.分别用氯虫苯甲酰胺(LC10)或氟虫腈(LC10)处理粘虫3龄幼虫24 h后,通过构建转录组测序文库并进行Illumina RNA-seq测序。结果表明,氯虫苯甲酰胺处理粘虫后,共有29个P450基因表达量上调,27个P45...
【文章来源】：河南科技学院河南省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Unigenes长度分布柱状图
第三章粘虫转录组测序及P450基因筛选15Unigenes，总长度为97934563bp，最小长度为201bp，最大长度为30776bp，平均长度为806bp，拼接所得转录本长度分布如图3-1，图3-2。图3-1Unigenes长度分布柱状图Fig3-1Unigeneslengthbar图3-2Unigenes长度频率分布图Fig3-2ThegraphofUnigeneslengthfrenquency将粘虫转录组拼接得到的Unigenes通过蛋白质数据库NR与家蚕（Bombyxmori）、小家鼠（Musmusculus）、黑脉金斑蝶（Danausplexippus）、棉铃虫（Helicoverpaarmigera）和小菜蛾（Plutellaxylostella）进行比对，Unigenes的同源相似比例分别为43.3%、15.9%、2.3%和15.1%（图3-3）。
粘虫对氯虫苯甲酰胺抗性相关细胞色素P450的鉴定16图3-3Unigene的同源基因百分比Fig3-3ThepercentageofhomologousgenesofUnigene将粘虫得到的Unigenes与NR、NT、PFAM、KOG、Swiss-Prot、KO和GO七大数据库分别进行蛋白序列、核酸序列、蛋白结构域、直系同源关系、表达产物代谢途径及功能注释，注释所占比例分别为43.01%、21.76%、33.55%、17.91%、30.49%、18.47%和33.87%（图3-4）。图3-4Unigenes的七大数据库注释比例Fig3-4TheratesofUnigenesannotationwithsevendatabases将被七大数据库注释后的Unigenes进行基因差异表达分析，其中横坐标是指基因在不同实验组中/不同样品中表达倍数变化，纵坐标指基因表达量变化的显著程度，qvalue
【参考文献】：
期刊论文
[1]西花蓟马不同RNA干扰技术比较研究[J]. 李恒,周知恩,陈勇,陆承聪,张祥琴,王谅,陈艺欣,田厚军,林硕,张洁,游泳,魏辉. 福建农业学报. 2019(10)
[2]剑麻内参基因筛选与稳定表达分析[J]. 张燕梅,王瑞芳,杨子平,鹿志伟,李俊峰,赵艳龙,陆军迎,周文钊. 热带作物学报. 2019(11)
[3]基于RNA干扰的台湾乳白蚁纤维素酶活抑制效果分析[J]. 候亚会,毕可可,孙龙华,谷岱霏,李志强. 环境昆虫学报. 2019(04)
[4]美国白蛾几丁质酶细菌表达的RNA干扰载体构建及其介导的RNA干扰[J]. 王越,张苏芳,徐瑶,方加兴,孔祥波,刘福,张真. 林业科学研究. 2019(02)
[5]灰飞虱对杀虫剂的抗性分子机制研究进展[J]. 徐鹿,赵钧,赵春青,徐德进,徐广春,许小龙,张亚楠,张月亮,韩召军,顾中言. 农药学学报. 2018(02)
[6]桉树焦枯病菌内参基因的筛选[J]. 陈慧洁,冯丽贞,李慧敏,杨泽慧,丁奕,郭朦朦. 森林与环境学报. 2018(01)
[7]中国陕晋两省部分地区粘虫田间种群的抗药性[J]. 赵玉玉,李帅,李怡萍,许向利,成卫宁,王熠,仵均祥. 农药学学报. 2017(02)
[8]蔬菜蚜虫抗药性现状及抗性治理策略[J]. 汤秋玲,马康生,高希武. 植物保护. 2016(06)
[9]粘虫蛾飞行过程中体温及呼吸强度变化[J]. 江幸福,张蕾,程云霞,罗礼智. 植物保护学报. 2015(06)
[10]昆虫对植物次生物质的代谢适应机制及其对昆虫抗药性的意义[J]. 陈澄宇,康志娇,史雪岩,高希武. 昆虫学报. 2015(10)
博士论文
[1]CYP6BG1和UGT33AA4介导的小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性的分子机制[D]. 李秀霞.中国农业大学 2018
硕士论文
[1]利用转基因RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因[D]. 王爽.贵州大学 2017
[2]斯氏艾美耳球虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 樊翀宇.内蒙古农业大学 2016
[3]西花蓟马的实时荧光定量PCR检测方法的建立及花蓟马线粒体全基因组序列的测定与分析[D]. 汤云霞.南京农业大学 2012
[4]家蚕常用内参基因的稳定性分析及两种实时荧光定量PCR方法比较[D]. 彭然.苏州大学 2012
[5]家蚕和二化螟两个乙酰胆碱酯酶的RNA干扰及功能分析[D]. 杨丽雯.南京农业大学 2011
本文编号：3002992
【文章来源】：河南科技学院河南省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Unigenes长度分布柱状图
第三章粘虫转录组测序及P450基因筛选15Unigenes，总长度为97934563bp，最小长度为201bp，最大长度为30776bp，平均长度为806bp，拼接所得转录本长度分布如图3-1，图3-2。图3-1Unigenes长度分布柱状图Fig3-1Unigeneslengthbar图3-2Unigenes长度频率分布图Fig3-2ThegraphofUnigeneslengthfrenquency将粘虫转录组拼接得到的Unigenes通过蛋白质数据库NR与家蚕（Bombyxmori）、小家鼠（Musmusculus）、黑脉金斑蝶（Danausplexippus）、棉铃虫（Helicoverpaarmigera）和小菜蛾（Plutellaxylostella）进行比对，Unigenes的同源相似比例分别为43.3%、15.9%、2.3%和15.1%（图3-3）。
粘虫对氯虫苯甲酰胺抗性相关细胞色素P450的鉴定16图3-3Unigene的同源基因百分比Fig3-3ThepercentageofhomologousgenesofUnigene将粘虫得到的Unigenes与NR、NT、PFAM、KOG、Swiss-Prot、KO和GO七大数据库分别进行蛋白序列、核酸序列、蛋白结构域、直系同源关系、表达产物代谢途径及功能注释，注释所占比例分别为43.01%、21.76%、33.55%、17.91%、30.49%、18.47%和33.87%（图3-4）。图3-4Unigenes的七大数据库注释比例Fig3-4TheratesofUnigenesannotationwithsevendatabases将被七大数据库注释后的Unigenes进行基因差异表达分析，其中横坐标是指基因在不同实验组中/不同样品中表达倍数变化，纵坐标指基因表达量变化的显著程度，qvalue
【参考文献】：
期刊论文
[1]西花蓟马不同RNA干扰技术比较研究[J]. 李恒,周知恩,陈勇,陆承聪,张祥琴,王谅,陈艺欣,田厚军,林硕,张洁,游泳,魏辉. 福建农业学报. 2019(10)
[2]剑麻内参基因筛选与稳定表达分析[J]. 张燕梅,王瑞芳,杨子平,鹿志伟,李俊峰,赵艳龙,陆军迎,周文钊. 热带作物学报. 2019(11)
[3]基于RNA干扰的台湾乳白蚁纤维素酶活抑制效果分析[J]. 候亚会,毕可可,孙龙华,谷岱霏,李志强. 环境昆虫学报. 2019(04)
[4]美国白蛾几丁质酶细菌表达的RNA干扰载体构建及其介导的RNA干扰[J]. 王越,张苏芳,徐瑶,方加兴,孔祥波,刘福,张真. 林业科学研究. 2019(02)
[5]灰飞虱对杀虫剂的抗性分子机制研究进展[J]. 徐鹿,赵钧,赵春青,徐德进,徐广春,许小龙,张亚楠,张月亮,韩召军,顾中言. 农药学学报. 2018(02)
[6]桉树焦枯病菌内参基因的筛选[J]. 陈慧洁,冯丽贞,李慧敏,杨泽慧,丁奕,郭朦朦. 森林与环境学报. 2018(01)
[7]中国陕晋两省部分地区粘虫田间种群的抗药性[J]. 赵玉玉,李帅,李怡萍,许向利,成卫宁,王熠,仵均祥. 农药学学报. 2017(02)
[8]蔬菜蚜虫抗药性现状及抗性治理策略[J]. 汤秋玲,马康生,高希武. 植物保护. 2016(06)
[9]粘虫蛾飞行过程中体温及呼吸强度变化[J]. 江幸福,张蕾,程云霞,罗礼智. 植物保护学报. 2015(06)
[10]昆虫对植物次生物质的代谢适应机制及其对昆虫抗药性的意义[J]. 陈澄宇,康志娇,史雪岩,高希武. 昆虫学报. 2015(10)
博士论文
[1]CYP6BG1和UGT33AA4介导的小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性的分子机制[D]. 李秀霞.中国农业大学 2018
硕士论文
[1]利用转基因RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因[D]. 王爽.贵州大学 2017
[2]斯氏艾美耳球虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 樊翀宇.内蒙古农业大学 2016
[3]西花蓟马的实时荧光定量PCR检测方法的建立及花蓟马线粒体全基因组序列的测定与分析[D]. 汤云霞.南京农业大学 2012
[4]家蚕常用内参基因的稳定性分析及两种实时荧光定量PCR方法比较[D]. 彭然.苏州大学 2012
[5]家蚕和二化螟两个乙酰胆碱酯酶的RNA干扰及功能分析[D]. 杨丽雯.南京农业大学 2011
本文编号：3002992
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