欧李转录因子ChNAC1基因抗旱性功能分析

发布时间：2021-01-30 02:38

　　欧李（Cerasus humilis（Bge.）Sok.）为蔷薇科（Rosaceae）樱桃属（Ceraras）经济林木,是中国特有的多年生物种。欧李原产于偏远的北部山区,荒野和其他一些人口稀少的地区,对干旱,寒冷和贫瘠环境具有很高的抵抗力。虽然欧李抗旱性极强,但目前对其应对胁迫的遗传和分子机制知之甚少。NAC（NAM,ATAF1/2,CUC2）转录因子家族是植物特异性转录因子超家族并且存在于广泛多样的植物中,在植物生长、发育和应激反应中均发挥调控作用。该转录因子在拟南芥、水稻等模式植物中的研究已经趋于成熟,然而在林木中的研究仅仅集中在调节木材形成、单萜及花青素合成等方面,调控非生物胁迫的研究有待加强。为了进一步丰富林木NAC转录因子的基因资源,我们以“农大四号”欧李为试验材料,克隆NAC转录因子基因ChNAC1并进行表征,探究其在干旱胁迫响应中的功能。主要的研究工作及结果如下:1、利用RT-PCR技术从欧李叶片系中克隆了欧李ChNAC1基因,该cDNA全长894bp,编码含有297个氨基酸的蛋白,存在典型的NAM保守结构域,分子量约为34.21kDa,等电点为8.09,为不稳定、亲水性... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１欧李总ＲＮＡ电泳检测??－

２．４试验结果与分析??２．４．１?ＯＷＶ＾ＩＣ７基因的获取??提取欧李叶片总ＲＮＡ后进行琼脂糖凝胶电泳检测并测试其浓度，电泳结果如图２－１??所示，２８ｓＲＮＡ、１８ｓＲＮＡ清晰可见，５ｓＲＮＡ条带较弱，条带无降解。ＯＤ２６０／２８０在??１．８－２．０之间，浓度在２００－３００之间，表明ＲＮＡ的纯度良好，可应用于后续相关试验。??——＾?２８ＳＲＮＡ??＂?１８ｓＲＮＡ??；ｌ；：；?＂?５ｓＲＮＡ??图２－１欧李总ＲＮＡ电泳检测??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃ．?ｈｕｍｉｌｉｓ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??以ＲＮＡ反转录获取的ｃＤＮＡ为模板，利用高保真酶进行ＰＣＲ扩增，得到一条特异??性条带，大小与预期一致（图２－２Ａ）。胶回收纯化后的ＤＮＡ条带清晰明亮（图２－??２Ｂ）。经测序比对发现该片段是欧李０？Ｍ４Ｃ／基因（图２－３），可用于后续载体的构建??过程。??Ａ??Ｂ??９?？８９４ｂｐ??３?？８９４ｂｐ?Ｉ??ＨＵ??图２－２Ｃ７？Ａ＾Ｃ７基因ＰＣＲ扩增（Ａ）与纯化（Ｂ）??Ｆｉｇ．?２－２?ＰＣＲ?ａｍｐ

２．４．２?ＣＡＡ＾Ｃｉ基因生物信息学分析??２．４．２．１?０福０的序列分析??从欧李中克隆的Ｃ７？Ａ＾Ｃ７ＣＤＳ序列如图２－４所示，全长８９４ｂｐ，编码含有２９７个氨??基酸的蛋白。该蛋白在氨基酸２５－３９６之间存在典型的ＮＡＭ保守结构域（图２－５）。??１?ＡＴＧＴＣＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴｎＡＣＡＧＣＴＧＣＣＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＡＧＧｍＣＡＴＣＣＧＡＣＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧ??１?｜?＾?３?ｉ?Ｑ?Ｌ?Ｐ?Ｐ?Ｇ?Ｆ?Ｒ?Ｆ?Ｈ?Ｆ?Ｔ?Ｄ?Ｈ??６１?ＣＴＣＧＴＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＴＣＴＧＯＣＧＣＡＡＡＴＧＣＣＡＧＴＣＧＣＡＧＣＣＧＡＴＴＴＣＧＯＴＯＣＣＧＡＴＡＡＴＣ??２ｉ?Ｉ

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于TXRF法的欧李果肉中营养元素特征分析[J]. 李卫东,李欧,和银霞,叶丽琴,王越,张忠爽,陈玉婷,金基石.  食品科学. 2015(04)
[2]植物NAC转录因子家族研究概况[J]. 彭辉,于兴旺,成慧颖,张桦,石庆华,李建贵,麻浩.  植物学报. 2010(02)
[3]内蒙古欧李果肉和果仁中营养成分分析[J]. 张美莉,邓秋才,杨海霞,张子仪.  氨基酸和生物资源. 2007(04)
[4]欧李的研究进展[J]. 汤志洪,蔡琳.  安徽农学通报. 2007(15)
[5]干旱胁迫对光果胀果甘草种子萌发及可溶性蛋白质含量的影响[J]. 梁新华,张明哲,高金霞.  宁夏农林科技. 2004(04)
[6]红钙果栽培技术与应用前景[J]. 刘十通.  中国生态农业学报. 2003(01)
[7]欧李系列产品的研制[J]. 杜俊杰,杜俊民,池建伟.  山西农业大学学报. 1999(01)

博士论文
[1]黄瓜NAC转录因子CsATAF1响应干旱胁迫的机制研究[D]. 王晋芳.中国农业大学 2018

硕士论文
[1]欧李生物学特性和性状相关性的研究[D]. 钱诚.河北工程大学 2013
[2]盐和干旱胁迫下欧李的生理响应及转录组分析[D]. 孙孟超.东北林业大学 2013



本文编号：3008073