温度对萼花臂尾轮虫衰老过程中相关基因表达特征研究
发布时间：2021-02-04 16:40
萼花臂尾轮虫（Brachionus calyciflorus Pallas）隶属于轮虫动物门（Rotifera）,单巢纲（Monogononta）,游泳目（Ploima）,臂尾轮虫科（Brachionidae）,是最常见的淡水浮游动物。由于其个体小（约100-500μm）、生命周期短（5-7d）、并且在实验室易于培养、衰老特征明显等特性,被认为是极具潜在价值的衰老生物学研究的模式生物之一。mTOR是一种高分子量的蛋白激酶,其响应细胞内的许多调节过程,包括有丝分裂及养分供应,其中S6K和S6基因为TOR信号通路的下游底物。而热休克蛋白（HSPs）是一种小分子量蛋白,在机体受到胁迫时被诱导并出现应激效应。mTOR的磷酸化可促进HSP70伴侣复合物的释放,同时伴随着合成热休克蛋白的能力大幅度下降。但二者间的调节机制及其相互作用在轮虫衰老过程中的作用尚鲜有报道。本文通过研究不同温度对萼花臂尾轮虫（B.calyciflorus）寿命,生殖量和生殖前期及生殖后期的影响;克隆TOR、S6K、S6和HSP70基因片段,并在不同温度不同时间处理后研究温度对其基因表达量的影响,以及研究高温和低温不同时间处...
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单巣纲轮虫的生活史Fig1.1Thelifehistorymodelofmonogonontarotifers
图 1.2 mTOR 蛋白组成结构注释：从左到右依次是，N 端有 12-20 个氨基酸组成介导蛋白互作的 HEAT repeat dom结构域、FAT 结构域（focal adhesion targeting domain）、FRB 结构域（FKBP12-rapambinding domain）和 C 末端的激酶结构域、FATC 结构域（focal adhesion targeting domaC-terminal domain）Figure 1.1 The structure of mTOR proteinPs: from left to right, HEAT repeat domain, focal adhesion targeting domain, FBP12-rapambinding, which is composed by 12-20 amino acids, domain and C-terminal kinase domain afocal adhesion targeting domain of C-terminal domain对酵母的研究表明，TOR 蛋白在生物体内发挥着两种基本功能; 一种是细胞生长，另一种是调节细胞生长的位置[38]。当生长条件有利时，TOR 蛋较活跃，酵母细胞维持核糖体的生物发生、翻译起始和营养导入的速率大。而，用雷帕霉素处理的快速生长的酵母细胞，由于缺乏氮或缺乏 TOR1 和 T都会显著下调一般蛋白质的合成，上调巨噬细胞的自噬作用，并激活血清应应转录因子。因此，当生长条件允许时，雷帕霉素敏感的 TOR 信号传导会
第 3 章 温度对萼花臂尾轮虫 TOR，S6K 和 S6 与 HSP70 基因表达量的影响提取轮虫的总 RNA 之后，我们需要对提取的轮虫 RNA 质量进行检测。将新提取的全部 RNA 用 DEPC 水稀释 50-100，然后用分光光度仪测定其在 260nm和 280nm 处的吸光值，因为 RNA 易降解的特性，所以整个过程都需要在冰上进行。OD260/OD280 正常值范围在 1.8-2.1 之间。如果实验所测得的比值大于 2.1，则 RNA 在提取过程中收到了一定的降解；如果实验所测得的比值小于 1.8，则表明轮虫的RNA提取过程受到了蛋白质或者DNA的污染。在电泳图中，若28sRNA与 18sRNA 条带的亮度比为 2:1（如图 3.1），则可认为所提取的萼花臂尾轮虫的RNA 纯度较高，即没有被降解。
【参考文献】：
期刊论文
[1]水产动物雷帕霉素受体信号通路的研究进展[J]. 辛芳,王雷,刘梅,王宝杰,蒋克勇,孙国琼. 海洋科学. 2016(01)
[2]mTOR信号通路与代谢性疾病[J]. 袁大陆. 当代体育科技. 2015(06)
[3]单巢类轮虫有性生殖的研究进展与展望[J]. 孙栋,牛翠娟. 湖泊科学. 2013(02)
[4]mTOR信号通路的生物学功能[J]. 陈洪菊,屈艺,母得志. 生命的化学. 2010(04)
[5]纳米多孔SiO2薄膜的制备与红外光谱研究[J]. 王娟,张长瑞,冯坚,杨大祥. 光谱学与光谱分析. 2005(07)
[6]环境因子对萼花臂尾轮虫种群动态的影响[J]. 席贻龙,黄祥飞,汪本勤,许蕴娴. 安徽师范大学学报(自然科学版). 2000(04)
[7]温度对壶状臂尾轮虫实验种群动态的影响[J]. 席贻龙,黄祥飞. 海洋与湖沼. 2000(01)
[8]淡水轮虫繁殖生物学研究进展[J]. 杨家新,黄祥飞,刘建康. 水产学报. 1999(03)
[9]密度和温度对萼花臂尾轮虫产卵量和混交雌体的影响[J]. 杨家新,黄祥飞. 湖泊科学. 1996(04)
[10]温度对萼花臂尾轮虫卵的发育、种群增长和生产量的影响[J]. 黄祥飞. 水生生物学报. 1985(03)
本文编号：3018618
【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单巣纲轮虫的生活史Fig1.1Thelifehistorymodelofmonogonontarotifers
图 1.2 mTOR 蛋白组成结构注释：从左到右依次是，N 端有 12-20 个氨基酸组成介导蛋白互作的 HEAT repeat dom结构域、FAT 结构域（focal adhesion targeting domain）、FRB 结构域（FKBP12-rapambinding domain）和 C 末端的激酶结构域、FATC 结构域（focal adhesion targeting domaC-terminal domain）Figure 1.1 The structure of mTOR proteinPs: from left to right, HEAT repeat domain, focal adhesion targeting domain, FBP12-rapambinding, which is composed by 12-20 amino acids, domain and C-terminal kinase domain afocal adhesion targeting domain of C-terminal domain对酵母的研究表明，TOR 蛋白在生物体内发挥着两种基本功能; 一种是细胞生长，另一种是调节细胞生长的位置[38]。当生长条件有利时，TOR 蛋较活跃，酵母细胞维持核糖体的生物发生、翻译起始和营养导入的速率大。而，用雷帕霉素处理的快速生长的酵母细胞，由于缺乏氮或缺乏 TOR1 和 T都会显著下调一般蛋白质的合成，上调巨噬细胞的自噬作用，并激活血清应应转录因子。因此，当生长条件允许时，雷帕霉素敏感的 TOR 信号传导会
第 3 章 温度对萼花臂尾轮虫 TOR，S6K 和 S6 与 HSP70 基因表达量的影响提取轮虫的总 RNA 之后，我们需要对提取的轮虫 RNA 质量进行检测。将新提取的全部 RNA 用 DEPC 水稀释 50-100，然后用分光光度仪测定其在 260nm和 280nm 处的吸光值，因为 RNA 易降解的特性，所以整个过程都需要在冰上进行。OD260/OD280 正常值范围在 1.8-2.1 之间。如果实验所测得的比值大于 2.1，则 RNA 在提取过程中收到了一定的降解；如果实验所测得的比值小于 1.8，则表明轮虫的RNA提取过程受到了蛋白质或者DNA的污染。在电泳图中，若28sRNA与 18sRNA 条带的亮度比为 2:1（如图 3.1），则可认为所提取的萼花臂尾轮虫的RNA 纯度较高，即没有被降解。
【参考文献】：
期刊论文
[1]水产动物雷帕霉素受体信号通路的研究进展[J]. 辛芳,王雷,刘梅,王宝杰,蒋克勇,孙国琼. 海洋科学. 2016(01)
[2]mTOR信号通路与代谢性疾病[J]. 袁大陆. 当代体育科技. 2015(06)
[3]单巢类轮虫有性生殖的研究进展与展望[J]. 孙栋,牛翠娟. 湖泊科学. 2013(02)
[4]mTOR信号通路的生物学功能[J]. 陈洪菊,屈艺,母得志. 生命的化学. 2010(04)
[5]纳米多孔SiO2薄膜的制备与红外光谱研究[J]. 王娟,张长瑞,冯坚,杨大祥. 光谱学与光谱分析. 2005(07)
[6]环境因子对萼花臂尾轮虫种群动态的影响[J]. 席贻龙,黄祥飞,汪本勤,许蕴娴. 安徽师范大学学报(自然科学版). 2000(04)
[7]温度对壶状臂尾轮虫实验种群动态的影响[J]. 席贻龙,黄祥飞. 海洋与湖沼. 2000(01)
[8]淡水轮虫繁殖生物学研究进展[J]. 杨家新,黄祥飞,刘建康. 水产学报. 1999(03)
[9]密度和温度对萼花臂尾轮虫产卵量和混交雌体的影响[J]. 杨家新,黄祥飞. 湖泊科学. 1996(04)
[10]温度对萼花臂尾轮虫卵的发育、种群增长和生产量的影响[J]. 黄祥飞. 水生生物学报. 1985(03)
本文编号：3018618
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