卵形鲳鲹TLR3信号通路相关基因的克隆与表达分析
发布时间：2021-02-05 00:09
先天免疫系统是机体抵御病原入侵的第一道保护屏障,其发挥作用依赖于PRRs对PAMPs的识别。TLRs是PRRs中一个重要家族,属于I型跨膜蛋白,通过识别不同的PAMPs,激活依赖MyD88或TRIF信号通路。TRIF信号通路始于TLR3识别PAMPs,随后募集并活化衔接蛋白TRIF,激活TBK1促使IRF3/7磷酸化,诱导IFN-β表达。活化的TRIF还可招募TRAF6,激活NF-κB,上调促炎细胞因子的表达水平,发挥免疫效应。卵形鲳鰺是我国南方地区重要的海水养殖品种,随着养殖规模的扩大,导致传染性疾病多发,严重影响着卵形鲳鰺养殖业的发展。鉴于TLR3信号通路在先天免疫中的重要作用,开展卵形鲳鲹TLR3鲹（TroTLR3）及其信号通路相关基因（TroTRIF、TroTRAF6和TroTBK1）的研究,将为病害防治以及抗病品种选育提供理论支撑。本研究获得了TroTLR3信号通路相关基因的全长cDNA,应用生物信息学方法预测上述基因的功能位点、三维结构;分析遗传进化规律;检测其在健康鱼体组织中的表达模式;探讨刺激条件下,免疫相关组织和非免疫相关组织中4个基因的表达规律;构建了4个基因的原核...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1 TLRS的分类、定位及配体
2 TLR3及其信号通路
2.1 TLR3的分子结构
2.2 TLR3的信号转导
3 TLR3信号通路相关分子的研究进展
3.1 TLR3
3.2 TRIF
3.3 TRAF6
3.4 TBK1
4 卵形鲳鲹分子免疫的研究进展
5 研究目的与意义
第二章 TroTLR3及TroTRIF基因的克隆与免疫应答初步研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验仪器
2.2 试剂与耗材
2.3 实验鱼处理与菌株
2.4 TroTLR3及TroTRIF基因全长cDNA克隆
2.5 TroTLR3及TroTRIF基因的生物信息学分析
2.6 TroTLR3及TroTRIF基因的免疫应答初步研究
3 结果
3.1 总RNA提取样品质量检测
3.2 TroTLR3及TroTRIF基因cDNA全长序列分析
3.3 同源性及进化分析
3.4 蛋白结构域比较
3.5 蛋白三维结构预测
3.6 不同脊椎动物TLR3和TRIF蛋白序列比较分析
3.7 TroTLR3及TroTRIF基因在正常组中的分布情况
3.8 LPS刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在组织中的表达变化
3.9 polyI:C刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在组织中的表达变化
3.10 溶藻弧菌刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在组织中的表达变化
4 讨论
4.1 TroTLR3和TroTRIF的序列特征
4.2 TroTLR3和TroTRIF基因在健康组织中的表达模式
4.3 刺激条件下TroTLR3和TroTRIF基因的表达变化
第三章 TroTLR3信号通路下游分子TroTRAF6和TroTBK1基因的克隆与免疫应答初步研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验仪器
2.2 试剂与耗材
2.3 实验鱼与菌株
2.4 TroTRAF6及TroTBK1基因全长cDNA克隆
2.5 TroTRAF6及TroTBK1基因的生物信息学分析
2.6 TroTRAF6及TroTBK1基因的免疫应答初步研究
3 结果
3.1 TroTRAF6及TroTBK1基因cDNA全长序列分析
3.2 同源性及进化分析
3.3 蛋白结构域比较
3.4 蛋白三维结构预测
3.5 不同脊椎动物TRAF6和TBK1蛋白序列比较分析
3.6 TroTRAF6和TroTBK1基因在正常组中的分布情况
3.7 LPS刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
3.8 polyI:C刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
3.9 溶藻弧菌刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
4 讨论
4.1 TroTRAF6和TroTBK1基因的序列特征
4.2 TroTRAF6和TroTBK1基因在健康组织中的表达模式
4.3 刺激条件下Tro TRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
第四章 TroTLR3信号通路相关基因原核、真核表达系统构建
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要仪器
2.2 实验试剂与耗材
2.3 菌株和质粒
2.4 TroTLR3信号通路相关基因ORF的克隆
2.5 TroTLR3信号通路相关基因原核表达载体的构建
2.6 TroTLR3信号通路相关基因真核表达载体的构建
2.7 原核重组蛋白的诱导表达
3 结果与分析
3.1 TroTLR3及其相关基因ORF的扩增与克隆
3.2 原核表达载体的构建
3.3 真核表达载体的构建
3.4 原核重组蛋白的诱导表达
4 讨论
第五章 总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular Characterization, Expression Profiles, and Immunostimulation Responses of TRAF6 and TAK1 in Japanese Flounder（Paralichthys olivaceus）[J]. ZHAO Haitao,CHEN Yan,WANG Zhigang,ZHANG Quanqi,YU Haiyang. Journal of Ocean University of China. 2019(01)
[2]赤眼鳟TRIF基因cDNA克隆及其组织表达分析[J]. 徐莹,李耀国,王荣华,刘巧林,王静安,赵鑫,肖调义. 湖南师范大学自然科学学报. 2018(02)
[3]pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定[J]. 马荣,肖婷,李瑾,孙慧,徐超,黄炳成,尹昆,赵桂华,崔勇,朱嵩,刘功振,闫歌,魏庆宽. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(02)
[4]广西北部湾大宗海水养殖鱼类卵形鲳鲹感染溶藻弧菌及其致病性研究[J]. 余庆,李菲,王一兵,覃仙玲,陈宪云,吴柳莹,李鹏飞. 广西科学. 2018(01)
[5]TLR3信号通路的研究进展[J]. 陆天明,许庆梅,马乐. 世界最新医学信息文摘. 2017(52)
[6]赤眼鳟TRAF6基因的cDNA克隆及其应对GCRV的免疫表达特性[J]. 陈开健,王静安,刘巧林,王荣华,徐莹,赵鑫,肖调义. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2016(06)
[7]赤眼鳟Toll样受体3基因cDNA全长克隆及表达分析[J]. 肖调义,李伟,王荣华,刘巧林,彭慧珍,苏建明. 水生生物学报. 2016(05)
[8]鸭TLR3基因胞外区的原核表达及抗体制备[J]. 宋凯杰,陈宗艳,黄云秀,李传峰,孟春春,李丹丹,张淼涛,刘光清. 中国动物传染病学报. 2015(05)
[9]半滑舌鳎TRAF6基因和TAK1基因的克隆及表达分析[J]. 陈燕,樊琳,刘田田,刘跃中,李赞,张全启. 中国水产科学. 2015(05)
[10]南海区卵形鲳鲹遗传多样性的研究[J]. 赵永贞,陈秀荔,李咏梅,彭敏,杨春玲,韦嫔媛,彭金霞,陈晓汉. 西南农业学报. 2014(04)
博士论文
[1]斜带石斑鱼TLR1、TLR2和MyD88基因的克隆与免疫应答研究[D]. 韦友传.广西大学 2011
本文编号：3019156
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 文献综述
1 TLRS的分类、定位及配体
2 TLR3及其信号通路
2.1 TLR3的分子结构
2.2 TLR3的信号转导
3 TLR3信号通路相关分子的研究进展
3.1 TLR3
3.2 TRIF
3.3 TRAF6
3.4 TBK1
4 卵形鲳鲹分子免疫的研究进展
5 研究目的与意义
第二章 TroTLR3及TroTRIF基因的克隆与免疫应答初步研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验仪器
2.2 试剂与耗材
2.3 实验鱼处理与菌株
2.4 TroTLR3及TroTRIF基因全长cDNA克隆
2.5 TroTLR3及TroTRIF基因的生物信息学分析
2.6 TroTLR3及TroTRIF基因的免疫应答初步研究
3 结果
3.1 总RNA提取样品质量检测
3.2 TroTLR3及TroTRIF基因cDNA全长序列分析
3.3 同源性及进化分析
3.4 蛋白结构域比较
3.5 蛋白三维结构预测
3.6 不同脊椎动物TLR3和TRIF蛋白序列比较分析
3.7 TroTLR3及TroTRIF基因在正常组中的分布情况
3.8 LPS刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在组织中的表达变化
3.9 polyI:C刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在组织中的表达变化
3.10 溶藻弧菌刺激后TroTLR3及TroTRIF基因在组织中的表达变化
4 讨论
4.1 TroTLR3和TroTRIF的序列特征
4.2 TroTLR3和TroTRIF基因在健康组织中的表达模式
4.3 刺激条件下TroTLR3和TroTRIF基因的表达变化
第三章 TroTLR3信号通路下游分子TroTRAF6和TroTBK1基因的克隆与免疫应答初步研究
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验仪器
2.2 试剂与耗材
2.3 实验鱼与菌株
2.4 TroTRAF6及TroTBK1基因全长cDNA克隆
2.5 TroTRAF6及TroTBK1基因的生物信息学分析
2.6 TroTRAF6及TroTBK1基因的免疫应答初步研究
3 结果
3.1 TroTRAF6及TroTBK1基因cDNA全长序列分析
3.2 同源性及进化分析
3.3 蛋白结构域比较
3.4 蛋白三维结构预测
3.5 不同脊椎动物TRAF6和TBK1蛋白序列比较分析
3.6 TroTRAF6和TroTBK1基因在正常组中的分布情况
3.7 LPS刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
3.8 polyI:C刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
3.9 溶藻弧菌刺激后TroTRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
4 讨论
4.1 TroTRAF6和TroTBK1基因的序列特征
4.2 TroTRAF6和TroTBK1基因在健康组织中的表达模式
4.3 刺激条件下Tro TRAF6和TroTBK1基因在组织中的表达变化
第四章 TroTLR3信号通路相关基因原核、真核表达系统构建
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要仪器
2.2 实验试剂与耗材
2.3 菌株和质粒
2.4 TroTLR3信号通路相关基因ORF的克隆
2.5 TroTLR3信号通路相关基因原核表达载体的构建
2.6 TroTLR3信号通路相关基因真核表达载体的构建
2.7 原核重组蛋白的诱导表达
3 结果与分析
3.1 TroTLR3及其相关基因ORF的扩增与克隆
3.2 原核表达载体的构建
3.3 真核表达载体的构建
3.4 原核重组蛋白的诱导表达
4 讨论
第五章 总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular Characterization, Expression Profiles, and Immunostimulation Responses of TRAF6 and TAK1 in Japanese Flounder（Paralichthys olivaceus）[J]. ZHAO Haitao,CHEN Yan,WANG Zhigang,ZHANG Quanqi,YU Haiyang. Journal of Ocean University of China. 2019(01)
[2]赤眼鳟TRIF基因cDNA克隆及其组织表达分析[J]. 徐莹,李耀国,王荣华,刘巧林,王静安,赵鑫,肖调义. 湖南师范大学自然科学学报. 2018(02)
[3]pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定[J]. 马荣,肖婷,李瑾,孙慧,徐超,黄炳成,尹昆,赵桂华,崔勇,朱嵩,刘功振,闫歌,魏庆宽. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(02)
[4]广西北部湾大宗海水养殖鱼类卵形鲳鲹感染溶藻弧菌及其致病性研究[J]. 余庆,李菲,王一兵,覃仙玲,陈宪云,吴柳莹,李鹏飞. 广西科学. 2018(01)
[5]TLR3信号通路的研究进展[J]. 陆天明,许庆梅,马乐. 世界最新医学信息文摘. 2017(52)
[6]赤眼鳟TRAF6基因的cDNA克隆及其应对GCRV的免疫表达特性[J]. 陈开健,王静安,刘巧林,王荣华,徐莹,赵鑫,肖调义. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2016(06)
[7]赤眼鳟Toll样受体3基因cDNA全长克隆及表达分析[J]. 肖调义,李伟,王荣华,刘巧林,彭慧珍,苏建明. 水生生物学报. 2016(05)
[8]鸭TLR3基因胞外区的原核表达及抗体制备[J]. 宋凯杰,陈宗艳,黄云秀,李传峰,孟春春,李丹丹,张淼涛,刘光清. 中国动物传染病学报. 2015(05)
[9]半滑舌鳎TRAF6基因和TAK1基因的克隆及表达分析[J]. 陈燕,樊琳,刘田田,刘跃中,李赞,张全启. 中国水产科学. 2015(05)
[10]南海区卵形鲳鲹遗传多样性的研究[J]. 赵永贞,陈秀荔,李咏梅,彭敏,杨春玲,韦嫔媛,彭金霞,陈晓汉. 西南农业学报. 2014(04)
博士论文
[1]斜带石斑鱼TLR1、TLR2和MyD88基因的克隆与免疫应答研究[D]. 韦友传.广西大学 2011
本文编号：3019156
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3019156.html
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