Grid1基因对雌性大鼠初情期和产仔性能的影响
发布时间：2021-02-05 07:20
本文旨在探讨动物初情期发育进程中,Grid1基因及其蛋白在雌性大鼠生殖轴上表达的规律,以及敲低Grid1基因对雌性大鼠初情期和产仔性能的影响,为动物初情期调控提供科学的理论依据。首先运用RT-qPCR和免疫荧光法分别分析Grid1 mRNA及其蛋白GluD1在不同发育阶段（幼年期、初情期前、初情期和成年期）雌性大鼠生殖轴上的变化;继而构建Grid1慢病毒载体（LV-Grid1）,添加入体外培养的下丘脑神经元,RT-qPCR和荧光细胞计数检测感染效率和敲低效率以及对生殖相关基因转录的影响;然后将21d SD大鼠分为3组,即LV-Grid1组、空白对照和LV-（-）组,侧脑室注射（intracerebroventricular injection,ICV injection）LV-Grid1 于下丘脑,分别于 7d、阴门开启时采取下丘脑、垂体、卵巢和血清,采用RT-qPCR检测敲低效率和生殖相关基因转录变化,ELISA分析血清生殖激素水平及组织学观察卵巢结构;发情时配种,统计窝产仔数、产活仔数和初生体重。所得研究结果如下:（1）从幼儿期到初情期前,大鼠下丘脑中Grid1 mRNA水平显著减...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１出生后ＧｎＲＨ神经元网络的发育ＰＩ
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２结果??２．１?在雌性大鼠生殖轴上的表达??２．１．１?ｍＲＮＡ在雌性大鼠生殖轴上的表达??不同发育阶段的雌性大鼠下丘脑、垂体均有Ｇｒ／心ｍＲＮＡ的表达（图２－１），??而卵巢上没有检测出。在下丘脑（图２－１Ａ），?Ｇｒ／Ｖ＂ｍＲＮＡ在初情期前、初情期??和成年期大鼠显著低于幼儿期（Ｐ＜０．０５），且初情期前大鼠显著低于初情期和成??年期（Ｐ＜０．０５），初情期和成年期间差异均不显著（Ｐ＞０．０５）；在垂体（图２－１Ｂ），??Ｇｒ／ＷｍＲＮＡ随着大鼠的发育逐渐降低，初情期前、初情期和成年期显著低于幼??儿期（Ｐ＜０．０５），成年期显著低于初情期前（＾＜０．０５），但初情期前和初情期??（７＾０．０５），初情期和成年期（／＾Ｏ．Ｏ〗）均无统计学意义。卵巢上未检测出（附??图?Ａ１）。??Ａ?Ｂ??Ｉ?ｉ??１?＊?ｉ??５?１５１?Ｉ￣；?Ｉ?５１５１?＊??５?Ｉ￣１?１?ａ?＿￡?Ｉ??ｉｒｏ＇?１—￣＾Ｔ１１—！?１１〇－?＾?＇?＊?１??１、，／?／?／?ｉ、，／?／?＃??图２－１雌性大鼠初情期发育进程中下丘脑（Ａ）和垂体（Ｂ）?Ｇｒｉｄｌ?ｍＲＮＡ表达水平??Ｆｉｇ．２－１?Ｇｒｉｄ！?ｍＲＮ?Ａ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ?（Ａ）?ａｎｄ?ｐｉｔｕｉｔａｒｖ－?（Ｂ）?ｉｎ?ｄｕｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ｐｕｂｅｒｔｙ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｆｅｍａｌｅ?ｒａｔｓ．??Ａ：?Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．?Ｂ：?Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ．??２．１．２?ＧＩｕＤｌ在雌性大鼠生殖轴上的分布??采用免疫荧光与荧光显微镜结合
【参考文献】：
期刊论文
[1]提高母羊产仔性能的几个方面[J]. 娜孜拉·沙皮汉. 现代畜牧科技. 2018(09)
[2]母猪产仔数影响因素研究进展[J]. 李崎川,丁后超,李强,刘洋,王玥,沈双. 养殖与饲料. 2018(07)
[3]GLUD1基因对人牙髓干细胞的体外增殖、分化和矿化的影响[J]. 卢皙,刘上峰,赵守亮. 上海口腔医学. 2017(04)
[4]GnRH基因的研究进展[J]. 高广亮,王阳铭. 畜禽业. 2016(06)
[5]GnRH依赖型性早熟遗传调控系统研究进展[J]. 韩威,李慧芳,朱云芬,宋迟,徐文娟. 家畜生态学报. 2013(01)
[6]亲代谢型谷氨酸受体和相关神经疾病[J]. 龙锐,杜俊蓉. 中国药理学通报. 2009(08)
[7]哺乳动物性早熟相关基因的研究进展[J]. 储明星,冯涛,狄冉,张宝云,张英杰. 遗传. 2009(01)
博士论文
[1]重性精神障碍谷氨酸能系统相关基因的分子遗传学及功能影像学研究[D]. 陈俊.北京协和医学院 2012
硕士论文
[1]DNA甲基化对雌性山羊初情期启动的影响[D]. 杨宸.安徽农业大学 2017
[2]Nesfatin-1/NUCB2在大鼠初情期启动中的作用与机制研究[D]. 王尧尧.安徽农业大学 2015
[3]初情期大鼠下丘脑DNMTs和MBPs的表达及基因组DNA甲基化谱[D]. 田园.安徽农业大学 2015
[4]雌激素对青春期前雌性大鼠下丘脑GnRH表达和分泌的影响[D]. 丁海珍.南京医科大学 2010
本文编号：3019246
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１出生后ＧｎＲＨ神经元网络的发育ＰＩ
Ｖ＇＃??，鮮，’公１．么３、戰?ｃ＿丨ｇｒｏｕｐ??Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩＣＶ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?一、一??ＬＶ－Ｇｒｉｄｌ??图１－１侧脑室注射位置及分组??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｇｒｏｕｐｉｎｇ?ｏｆ?ＩＣＶ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ??１．３．４慢病毒载体构建??Ｇｒｉｄｌ慢病毒载体（ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ?ｖｅｃｔｏｒ－Ｇｒｉｄｌ，?ＬＶ－Ｇｒｉｄｌ）有上海吉玛制药技术有??限公司构建，ｓｉＲＮＡ－Ｇｒｉｄｌ?序列为：５’?ＧＣＡＣＡＴＣＣＣＡＣＡＣＣＴＣＴＴＴ－３，，获得慢??病毒滴度为ｌｘｌ０９ＴＵ／ｍＬ。??１．３．５组织样品处理及采集??（１）对饲养至１０ｄ，初情期前（２８ｄ），初情期，成年间情期大鼠，以及侧??脑室注射后７ｄ大鼠，阴门开启大鼠，ＬＶ－Ｇｒｉｄｌ组阴门开启而空白对照及ＬＶ－（－）??组匹配同日龄的大鼠做以下处理：??①采血：颈部脱臼，断颈采血２ｍＬ，?４°Ｃ静置４ｈ，?３０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，??血清以７（＾Ｌ每管分装后置于－２０°Ｃ保存，用于检测血清中ＧｌｕＤｌ，?Ｅ２，?Ｐ４，?ＦＳＨ，??ＬＨ的浓度。??②取材：将铝盒内高压灭菌的手术器械置于ＤＥＰＣ水中浸泡３０ｍｉｎ，置于超??净台中。大鼠迅速断头处理，用７５％酒精将全身皮肤消毒后迅速置于超净台中。??取材者与超净台靠近酒精灯处剪开头部皮肤，利用剪刀打开颅骨取出下丘脑（位??于大脑腹面、丘脑的下方）、垂体、卵巢放置于做好标记的冻存管中，快速放入??液氮中。随后剪开腹部皮肤和肌肉，摘取卵巢称重，其中一侧卵巢快速放入冻存??管置于液氮中，另－？侧卵巢用游标卡尺测量横径、纵径、横周长、纵周
２结果??２．１?在雌性大鼠生殖轴上的表达??２．１．１?ｍＲＮＡ在雌性大鼠生殖轴上的表达??不同发育阶段的雌性大鼠下丘脑、垂体均有Ｇｒ／心ｍＲＮＡ的表达（图２－１），??而卵巢上没有检测出。在下丘脑（图２－１Ａ），?Ｇｒ／Ｖ＂ｍＲＮＡ在初情期前、初情期??和成年期大鼠显著低于幼儿期（Ｐ＜０．０５），且初情期前大鼠显著低于初情期和成??年期（Ｐ＜０．０５），初情期和成年期间差异均不显著（Ｐ＞０．０５）；在垂体（图２－１Ｂ），??Ｇｒ／ＷｍＲＮＡ随着大鼠的发育逐渐降低，初情期前、初情期和成年期显著低于幼??儿期（Ｐ＜０．０５），成年期显著低于初情期前（＾＜０．０５），但初情期前和初情期??（７＾０．０５），初情期和成年期（／＾Ｏ．Ｏ〗）均无统计学意义。卵巢上未检测出（附??图?Ａ１）。??Ａ?Ｂ??Ｉ?ｉ??１?＊?ｉ??５?１５１?Ｉ￣；?Ｉ?５１５１?＊??５?Ｉ￣１?１?ａ?＿￡?Ｉ??ｉｒｏ＇?１—￣＾Ｔ１１—！?１１〇－?＾?＇?＊?１??１、，／?／?／?ｉ、，／?／?＃??图２－１雌性大鼠初情期发育进程中下丘脑（Ａ）和垂体（Ｂ）?Ｇｒｉｄｌ?ｍＲＮＡ表达水平??Ｆｉｇ．２－１?Ｇｒｉｄ！?ｍＲＮ?Ａ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ?（Ａ）?ａｎｄ?ｐｉｔｕｉｔａｒｖ－?（Ｂ）?ｉｎ?ｄｕｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ｐｕｂｅｒｔｙ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｆｅｍａｌｅ?ｒａｔｓ．??Ａ：?Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ．?Ｂ：?Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ．??２．１．２?ＧＩｕＤｌ在雌性大鼠生殖轴上的分布??采用免疫荧光与荧光显微镜结合
【参考文献】：
期刊论文
[1]提高母羊产仔性能的几个方面[J]. 娜孜拉·沙皮汉. 现代畜牧科技. 2018(09)
[2]母猪产仔数影响因素研究进展[J]. 李崎川,丁后超,李强,刘洋,王玥,沈双. 养殖与饲料. 2018(07)
[3]GLUD1基因对人牙髓干细胞的体外增殖、分化和矿化的影响[J]. 卢皙,刘上峰,赵守亮. 上海口腔医学. 2017(04)
[4]GnRH基因的研究进展[J]. 高广亮,王阳铭. 畜禽业. 2016(06)
[5]GnRH依赖型性早熟遗传调控系统研究进展[J]. 韩威,李慧芳,朱云芬,宋迟,徐文娟. 家畜生态学报. 2013(01)
[6]亲代谢型谷氨酸受体和相关神经疾病[J]. 龙锐,杜俊蓉. 中国药理学通报. 2009(08)
[7]哺乳动物性早熟相关基因的研究进展[J]. 储明星,冯涛,狄冉,张宝云,张英杰. 遗传. 2009(01)
博士论文
[1]重性精神障碍谷氨酸能系统相关基因的分子遗传学及功能影像学研究[D]. 陈俊.北京协和医学院 2012
硕士论文
[1]DNA甲基化对雌性山羊初情期启动的影响[D]. 杨宸.安徽农业大学 2017
[2]Nesfatin-1/NUCB2在大鼠初情期启动中的作用与机制研究[D]. 王尧尧.安徽农业大学 2015
[3]初情期大鼠下丘脑DNMTs和MBPs的表达及基因组DNA甲基化谱[D]. 田园.安徽农业大学 2015
[4]雌激素对青春期前雌性大鼠下丘脑GnRH表达和分泌的影响[D]. 丁海珍.南京医科大学 2010
本文编号：3019246
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