中国水仙FOMT家族基因的克隆及FOMT2基因的调控因子筛选

发布时间：2021-02-08 01:11

　　植物的O-甲基转移酶（OMTs）被认为参与了植物次生代谢产物的甲基化,尤其是在苯丙烷类和类黄酮化合物合成途径,而类黄酮代谢途径生物合成过程中的酶促反应受到转录因子的调控,有关中国水仙（Narcissustazettavar.chinensis）转录因子与花色基因的相互作用鲜有报道。本文重点克隆了中国水仙FOMTs（Flavonol-O-Methyltransferases,类黄酮O-甲基转移酶）基因并进行生物信息学分析与荧光定量PCR分析,探讨了 NtFOMTs基因的特征,并利用酵母单杂交技术（Yeast-One-Hybrid）建立中国水仙酵母单杂交文库,通过酵母单杂交实验筛选出对其有转录调控作用的转录因子,对转录因子进行分析,以期为研究中国水仙花色基因提供新的借鉴。主要研究结果如下:1.分离了类黄酮生物合成途径相关基因FOMTs:根据RNA-seq数据库筛选差异表达的中国水仙FOMT基因,共获得3条基因,采用RT-PCR与RACE技术相结合,从水仙中成功克隆出3条FOMTs基因的 cDNA 全长,分别为NtF MT1,NtFOMT2,NtFOMT3,NtFOMT。基因cDNA全长为1... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?Ｒ２Ｒ３－ＭＹＢ对类黄酮生物合成的调控［６８，７０，７１］??Ｆｉｇ?１－１．?Ｒ２Ｒ３－ＭＹＢ?ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌａｖｏｎｏｉｄ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉ?

??ＭＲ＾／Ｔ２基因ｃＤＮＡ全长为１４０４?ｂｐ，其中５＇?ＵＴＲ长度为３３?ｂｐ?Ｊ?ＵＴＲ长??度为２７９ｂｐ，?ＯＲＦ为１０９２ｂｐ，编码３６３个氨基酸（图２－３）。??ＭＦＯＭ７３基因ｃＤＮＡ全长为１２０６?ｂｐ，其中ＹＵＴＲ长度为１１７?ｂｐ，ＯＲＦ为??１０８９?ｂｐ

以中国水仙花瓣基因组ＤＮＡ为模板，扩増得到ＭＦＯＭＤ的基因组序列，与??ｃＤＮＡ序列进行比较后，去除内含子部分，克隆得到了类黄酮合成途径相关基因??ＦＯＭＴ？的５’端调控序列（图３－１?）。??Ｍ?１??７５０?■??图３－１：?基因５’端调控序列的克隆??Ｍ：?２０００?Ｍａｋｅｒ；?１：?ＭＦＯＭＴ２基因５’端调控序列的ＰＣＲ产物??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?５＇?ｔｅｒｍｉｎａｌ?ｉｎ?ＮｔＦ０ＭＴ２??Ｍ?：?２０００?Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＮｔＦＯＭＴ２?５５?ｔｅｒｍｉｎａｌ??２．２?ＭＦＯＭｒ２基因启动子顺式作用元件分析??将得到的５’端调控序列提交到在线软件ＰｌａｎｔＣａｒｅ上进行分析（见图３－２），??结果表明中国水仙ＦＯＭＴ２基因启动子序列除包含必需的起始转录位点??（ｔｘａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓｔａｒｔｓｉｔｅ，ＴＳＳ）?ＴＡＴＡ－ｂｏｘ、ＣＡＡＴ增强子外，还有ＡＴＣＴ－ｍｏｔｉｆ，??ＡＣＥ，?Ｇ－ｂｏｘ，?Ｓｐｌ等多个光响应元件。此外，该启动子序列还含有真菌诱导子??响应元件Ｂｏｘ－Ｗｌ，表达分生组织相关元件ＣＡＴ－ｂｏｘ，参与茉莉酸甲酯响应的顺??式调控元件ＣＧＴＣＡ－ｍｏｔｉｆ、ＴＧＡＣＧ－ｍｏｔｉｆ，?ＭＹＢ参与抗旱诱导的结合位点ＭＢＳ??元件


本文编号：3023133