细菌染色体第1类整合子捕获耐药性基因盒反应模型的构建

发布时间：2021-02-09 07:00

　　【背景】整合子在细菌耐药性的获得及传播中占据重要地位,对于整合反应检测方法的改良及反应机制的研究,可以加深我们对细菌耐药性产生和播散的理解,为遏制耐药菌株的产生和播散提供新的途径。【目的】在细菌染色体上构建第1类整合子反应模型,用于评价整合酶介导的基因盒位点特异性重组。【方法】采用PCR分别扩增含氯霉素耐药基因cat的CM片段、含基因盒aadA5的LacA5片段、含整合子重组位点attI1及强可变区启动子的PcS片段和插入位点两侧的同源臂,重叠延伸聚合酶链反应连接上述5个片段制备整合子模型插入片段,通过同源重组将构建好的整合子模型片段插入大肠埃希菌JM109染色体中。转入高表达第1类整合酶的质粒pHSint,在链霉素平板上筛选发生整合的菌株,并用聚合酶链反应和测序验证。【结果】构建的整合子模型片段经测序与预期一致,整合子模型片段成功插入大肠埃希菌JM109染色体中。转入高表达整合酶的质粒pHSint后,在链霉素平板上成功筛选出基因盒aadA5发生整合的菌株,经聚合酶链反应扩增并测序与预期一致。【结论】在大肠埃希菌染色体上成功构建第1类整合酶介导基因盒位点特异性重组反应模型,为进一步揭示... 

【文章来源】：微生物学通报. 2020,47(11)北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株和质粒
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 PCR扩增构建模型的单个DNA片段
    1.4 重叠延伸PCR连接5个单片段
    1.5 通过同源重组将UCAPSD片段插入大肠埃希菌JM109染色体中
    1.6 插入成功菌株的鉴定
    1.7 链霉素平板筛选发生整合的菌株
    1.8 通过PCR和测序验证发生整合的菌株
2 结果与分析
    2.1 UCAPSD打靶片段的构建
    2.2 插入菌株CLJM109Ⅰ的验证
    2.3 整合菌株的鉴定
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]临床分离变形杆菌不典型第1类整合子结构分析[J]. 魏取好,肖林林,胡庆丰,李万翔,刘维薇.  中华微生物学和免疫学杂志. 2018 (06)



本文编号：3025248