辣椒疫霉菌肉碱脂酰转移酶基因CAT的表达、蛋白纯化及结晶

发布时间：2021-02-09 20:12

　　肉碱脂酰转移酶CAT是与附着胞的形成紧密相关的一类酶,与辣椒疫霉菌的致病性密切相关。该研究基于辣椒疫霉菌全基因组序列,以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组DNA为试材扩增CAT基因,采用了原核表达方法诱导表达重组蛋白6×His-CAT,并对重组蛋白进行亲和层析纯化、分子排阻层析纯化及蛋白结晶试验,以期获得纯蛋白及蛋白晶体。结果表明:经上述方法所获蛋白具有较高的纯度,且有较好的结晶性能,为进一步阐明CAT作用机理奠定基础。 

【文章来源】：北方园艺. 2020,(11)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

二次分子排阻层析纯化重组蛋白6×His-CAT

纯蛋白6×His-CAT的结晶

将测序验证后的CAT基因与表达载体pET28a(+)连接转化E.coli BL21 (DE3)表达菌株,菌液经不同浓度IPTG诱导,以空载体原核表达产物为阴性对照,通过SDS-PAGE电泳检测重组蛋白6×His-CAT表达情况,发现在70 kDa左右出现一条明显的蛋白条带(图1),且不同浓度IPTG对重组蛋白表达量影响不明显,最终确定的诱导条件为0.1 mmol·L-1的IPTG,16 ℃下诱导20 h左右收集菌液,1 L菌液中大约收集4 g左右的菌体。图2 重组蛋白6×His-CAT的亲和层析纯化

【参考文献】：
期刊论文
[1]辣椒轻斑驳病毒葫芦岛分离物RNA杂交检测体系的建立[J]. 周涛,于曼,张鑫宇,安梦楠,吴元华.  中国植保导刊. 2018(12)
[2]生物杀菌剂REMEDIER与嘧菌酯混配对辣椒疫病的防治效果[J]. 刘荣云,缪武,董亚静,孙佳杰,杨石奇.  湖南农业科学. 2018(10)
[3]黄瓜霜霉病的研究进展及登记防治农药的分析[J]. 陈永明,谷莉莉,林双喜,王苹,丁蕾,吴树静.  农学学报. 2018(08)
[4]枯草芽孢杆菌C-D6对辣椒炭疽菌附着胞形成的抑制作用研究[J]. 曾大兴,张晓阳,贾书娟,喇文军,涂国全.  微生物学通报. 2015(12)
[5]稻瘟菌附着胞形成和发育的研究进展[J]. 彭陈,陈洪亮,张玉琼,郭士伟.  微生物学通报. 2011(08)
[6]植物病原真菌附着胞的机械穿透力[J]. 王洪凯,林福呈,王政逸.  菌物学报. 2004(01)



本文编号：3026169