转基因大豆MON87751基体标准物质的定值

发布时间：2021-02-14 18:17

　　转基因安全管理和标识制度的实施需要标准化的检测方法和转基因检测标准物质,标准物质是获得准确、可靠、可比检测结果的保证。转基因大豆MON87751已被我国批准进口用作加工原料,因此转基因大豆MON87751的安全监管亟需制备标准物质。本研究优化了MON87751的数字PCR定值方法,并组织9家实验室对本课题前期研制的MON87751标准物质进行了联合定值。定值结果,MON87751标准物质的量值达到1.002 2,相对不确定度为0.011（copy/copy）,满足实际的检测需求。 

【文章来源】：植物检疫. 2020,34(06)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

MON87751/Lectin二重数字PCR特异性检测扩增图

微滴式数字PCR的理论有效线性范围是1～120 000 copies,2μL反应液在微滴生成器中只能产生12 000～16 000个有效微滴，微滴数大于10 000为有效反应。为了测试二重数字PCR系统的动力学范围，将MON87751基因组DNA稀释，加入反应体系中的模板量分别为1.145 1×104、2.290 2×103、4.580 4×102、9.160 9×101、1.832 2×101和3.6 copies。微滴数字PCR的测量值分别为11 470、2 300、456、88、20和9 copies。分析预期值和测量值的相关性发现，当模板量在20～11 400 copies之间时，通过微滴数字PCR获得的测量值与预期拷贝数浓度间具有良好的相关性，线性回归方程为y=1.015 7x，决定系数R2值等于0.988（图2）；而拷贝数浓度低至4copies/μL，测量值偏离预期值。根据数字PCR的动力学范围测定结果，当DNA浓度在20～11 400copies/μL之间，定量结果准确可靠。因此，在本项目中推荐配置数字PCR反应体系前，将基因组DNA稀释到100～5 000 copies/μL之间，加2μL DNA溶液到数字PCR反应体系中，使初始模板量在200～10 000 copies，可获得稳定、可靠的检测结果。2.2.3 数字PCR的稳定性良好

【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因产品检测标准物质量值一致性研究进展[J]. 王颢潜,李夏莹,张丽,赵新,陈锐,陈笑芸,高芳瑞,兰青阔,王永,张秀杰.  生物技术通报. 2020(05)
[2]转基因作物发展及应用概述[J]. 沈平,武玉花,梁晋刚,卢新,章秋艳,王颢潜,刘鹏程.  中国生物工程杂志. 2017(01)
[3]转基因产品检测标准物质的定值和不确定度研究进展[J]. 张丽,吴刚,武玉花,沈平,宋贵文,周云龙.  农业生物技术学报. 2014(03)



本文编号：3033640