梨咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因PbCCoAOMT1的功能验证

发布时间：2021-02-19 06:32

　　石细胞团的含量及大小是决定梨果实品质的关键因素之一。目前已知木质素是石细胞主要组成成分,而梨中木质素合成关键酶CCoAOMT的功能目前尚不明晰。为此,克隆PbCCoAOMT1编码区全长（MF346688.1）并构建真核表达载体pCAMBIA1301a-PbCCoAOMT1。通过农杆菌介导的浸花法将PbCCoAOMT1转化野生型拟南芥,利用分子检测确定获得阳性过表达PbCCoAOMT1拟南芥株系后,对其纯合T3代株系花序茎进行木质素及次生细胞壁特异性染色。结果表明,在拟南芥中过表达PbCCoAOMT1可以一定程度上促进次生壁的发育及木质化。运用溴乙酰法测定拟南芥花序茎中木质素含量发现,转基因植株中木质素含量较野生型显著上升,为野生型的1.24倍。进一步说明PbCCoAOMT1在木质素生物合成中具有重要作用。 

【文章来源】：安徽农业大学学报. 2020,47(05)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Pb CCo AOMT1带酶切位点序列扩增电泳图

重组质粒p CAMBIA1301a-Pb CCo AOMT1双酶切验证图

经过抗性筛选的转基因植株移栽到营养土中培养50 d后，选择野生型和转基因拟南芥叶片，提取DNA并进行GFP序列扩增检测。PCR结果显示，经过抗性筛选的拟南芥DNA均可扩增出750 bp的GFP条带，而野生型拟南芥未出现此条带（图3）。说明p CAMBIA1301a-Pb CCo AOMT1已成功整合进野生型拟南芥基因组。随后对3个转基因株系中Pb CCo AOMT1转录水平进行检测。由图4可知，野生型拟南芥中未检测到Pb CCo AOMT1表达，而3个转基因株系中Pb CCo AOMT1均检测到显著的转录水平。说明Pb CCo AOMT1已成功在拟南芥中异源表达。

【参考文献】：
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本文编号：3040740