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不同年龄人骨髓间充质干细胞成骨能力及差异基因表达谱研究

发布时间:2021-02-22 22:18
  目的:本研究旨在检测随年龄增长,人骨髓间充质干细胞成骨能力的改变以及细胞衰老程度;通过基因芯片技术检测不同年龄组人骨髓间充质干细胞差异基因表达情况,为骨髓间充质干细胞作为种子细胞在组织工程临床转化过程中提供理论依据。方法:1.不同年龄组人骨髓间充质干细胞(BMSC)收集、培养、鉴定按照年龄分为:胎儿组(fetal-BMSC,20周-24周,n=6),青年组(young/adult-BMSC,16岁-30岁,n=6),老年组(old-BMSC,>60岁,n=6),根据此年龄分组收集,分离获得细胞。流式细胞术检测间充质干细胞表面标志物。对分离所得细胞进行成骨、成脂诱导分化及茜素红、油红O染色。2.检测不同年龄组人骨髓间充质干细胞成骨分化能力培养不同年龄组骨髓间充质干细胞,进行成骨诱导分化2周,通过茜素红染色鉴定间充质干细胞成骨分化能力的变化,用Real-time PCR检测成骨相关基因表达水平变化。3.不同年龄组人骨髓间充质干细胞衰老程度的比较通过细胞衰老β-半乳糖苷酶染色检测不同年龄组人骨髓间充质干细胞衰老程度。通过Real-time PCR检测衰老相关基因P21、P16表达变化。... 

【文章来源】:天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】:66 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

不同年龄人骨髓间充质干细胞成骨能力及差异基因表达谱研究


流式细胞术检测干细胞表面标志物

诱导分化,脂滴,油红,红色


镜下观察未见明显红色结节形成,如下图所示 。空白对照组 诱导分化组图 1-2 成骨诱导茜素红染色(Bar=100 μm)成脂诱导分化培养两周,镜下观察可见,细胞增殖速率减慢,细胞逐渐膨大,细胞形态从长梭形转向椭圆形。随着成脂诱导分化时间增加,倒置显微镜下可见细胞内形成的脂滴数目递增,后按前所述方式进行油红 O 染色,成脂诱导分化组镜下可见细胞内脂滴被染为红色,而成脂诱导空白对照组未见明显脂滴形成,油红 O 染色未观察到被染为红色的脂滴,如下图所示。

红色,结节形成,分化培养,分化能力


天津医科大学硕士学位论文1.2.2 分离所得细胞的成骨、成脂分化能力成骨诱导分化培养 14 天,逐渐开始形成钙化结节,伴随着成骨诱导培养时间增加,在显微镜下观察可以发现钙化结节数目增加明显。按前面所述方法进行茜素红染色后,镜下观察可见成骨诱导分化组内细胞中形成数量、形态大小不等、颜色深浅不等的的红色结节,成骨诱导空白对照组细胞茜素红染色后,镜下观察未见明显红色结节形成,如下图所示 。

【参考文献】:
期刊论文
[1]Role of Hox genes in stem cell differentiation[J]. Anne Seifert,David F Werheid,Silvana M Knapp,Edda Tobiasch.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)



本文编号:3046626

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