经动脉灌注慢病毒介导的CD/TK基因转染大鼠腹壁游离皮瓣治疗乳腺癌的实验研究

发布时间：2021-02-24 10:45

　　目的:1、检测慢病毒载体介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒胸苷激酶（CD/TK）双自杀基因在大鼠乳腺癌SHZ-88细胞中的表达情况和对乳腺癌细胞的杀伤效应与旁观者效应。2、评估经动脉灌注重组慢病毒转染SD大鼠游离腹壁浅动脉穿支（SIEA）皮瓣后CD/TK基因在皮瓣内的表达情况。3、探讨CD/TK双自杀基因过表达慢病毒体系联合前药5-氟胞嘧啶与更昔洛韦（5-FC+GCV）对大鼠乳腺癌移植瘤生长的抑制情况。4、探讨游离皮瓣在感染CD/TK双自杀基因过表达慢病毒体系后是否会产生全身性的毒副反应。方法:1、将扩增后的载体质粒（目的质粒或空载质粒）、慢病毒包装质粒与包膜质粒共转染HEK293T感受态细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,将细胞上清液高速离心以浓缩纯化病毒,将浓缩的慢病毒10倍梯度稀释后感染HEK 293T细胞,观察细胞中绿色荧光蛋白（GFP）的表达情况,根据下列公式计算重组慢病毒的滴度:病毒滴度=表达荧光蛋白的细胞数/病毒原液量。2、分别将不同感染复数（MOI）的LV-CD/TK与LV-GFP重组慢病毒感染SHZ-88细胞,测定慢病毒对细胞的感染效率;采用CCK-8检测感染... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
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英文摘要
引言
第一部分 慢病毒介导的CD/TK双自杀基因在SHZ-88乳腺癌细胞中的表达与作用
    第一章 CD/TK双自杀基因过表达慢病毒体系的构建
        —.实验设计
        二.技术路线
        三.实验材料
        四.慢病毒包装系统信息
        五.实验方法
        六.实验结果
        七.实验讨论
        八.实验结论
    第二章 CD/TK双自杀基因过表达慢病毒体系在SHZ-88乳腺癌细胞中的表达、直接杀伤效应与旁观者效应
        一.实验设计
        二.技术路线
        三.实验材料
        四.实验方法
        五、实验结果
        六、讨论
        七、结论
第二部分 慢病毒介导的CD/TK双自杀基因经动脉灌注转染大鼠游离的SIEA皮瓣对乳腺癌移植瘤的影响
    第一章 SD大鼠SIEA皮瓣的解剖灌注与乳腺癌移植瘤模型的建立
实验设计">        一_实验设计
        二.实验材料
        三.实验方法
        四、实验结果
        五、讨论
        六、结论
    第二章 经动脉灌注的CD/TK双自杀基因过表达慢病毒体系转染大鼠游离的SIEA皮瓣对乳腺癌移植瘤的影响
        一.实验设计
        二.技术路线
        三.实验材料
        四.实验方法
        五、实验结果
        六、讨论
        七、结论
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
英文缩略词及中英文对照索引
附录
    附录一 附图
    附录二 附表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠腹壁浅动脉穿支皮瓣的解剖学[J]. 方冬,林海双,余丰,章思芳,丁茂超,崔怀瑞,唐茂林,徐达传.  解剖学报. 2014(04)
[2]携带人VE-cadherin基因的慢病毒载体的构建及其在Sup-B15白血病细胞株的表达[J]. 张焕新,陈翀,曾令宇,闫志凌,李振宇,徐开林.  中国实验血液学杂志. 2011(03)
[3]Construction and identification of recombinant lentiviral vector containing HIV-1 Tat gene and its expression in 293T cells[J]. Bingbing Wei a ,Ninghan Feng a ,Feng Zhou b ,Chun Lu b ,Jiantang Su a ,Lixin Hua a a Department of Urology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China b Department of Microbiology and Immunology,Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China.  Journal of Biomedical Research. 2010(01)
[4]慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在小鼠T淋巴细胞中的表达[J]. 李振宇,徐开林,潘秀英,孙海英,高飞,鹿群先,李德鹏,何徐彭.  中国实验血液学杂志. 2007(01)
[5]大豆异黄酮对大鼠乳腺癌细胞内cAMP/PKA信号途径的影响[J]. 林成招,马海田,邹思湘,王国杰,陈伟华,韩正康.  生理学报. 2005(04)
[6]抗癌药物动脉灌注对局部轴型皮瓣血供的影响[J]. 王肃生,冀航,梁刚,张志华,丁海曙.  中华生物医学工程杂志. 2007 (01)

博士论文
[1]经动脉灌注LV-mIL12转染大鼠带蒂SIEA皮瓣对在体乳腺癌SHZ-88细胞生长影响的研究[D]. 崔雅宁.北京协和医学院 2012



本文编号：3049254