JAM3基因在食管癌中的甲基化及表达调控

发布时间：2021-02-25 23:30

　　背景食管癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在全球分别位居第7位和第6位。食管癌的分布具有地域性特点,在我国食管癌主要分布在太行山地区,食管鳞状细胞癌（ESCC）是主要的病理类型。环境因素通过改变遗传学和表观遗传学修饰在食管癌的发生、发展中起着重要的作用。连接黏附分子-3（JAM3）是JAM家族中的一员,又称连接黏附分子-C（JAMC）。最近发现JAM3在结直肠癌中频繁发生甲基化,且JAM3在结直肠癌中为抑癌基因,但是JAM3基因在食管癌中的甲基化情况尚不清楚。目的探讨JAM3基因启动子区在食管癌中的甲基化情况及其表达调控以及JAM3基因启动子区异常甲基化作为食管鳞癌的潜在诊断标志物的可能性。方法1.用半定量RT-PCR检测5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-dc）处理前后食管癌细胞系KYSE140、KYSE150、KYSE410、KYSE450、COLO680N、KYSE520和TE13中JAM3基因的表达情况。2.应用甲基化特异性PCR（MSP）检测食管癌细胞系中JAM3基因启动子区的甲基化状态。3.用MSP技术检测正常食管粘膜组织中JAM3基因启动子区的甲基化状态,排除JA... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

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【学位级别】：硕士

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-Aza-dc处理前后食管癌细胞系中JAM3的表达情况；

25胞中JAM3表达水平不变，KYSE150、KYSE410、COLO680N、TE13细胞JAM3表达恢复(见图2.1）。上述结果表明JAM3基因在食管癌细胞系中的表达受到甲基化的调控。图2.15-Aza-dc处理前后食管癌细胞系中JAM3的表达情况；（-）未处理的细胞系；(＋)：处理的细胞系；ddH2O：双蒸馏水，作为空白对照，排除体系污染；GAPDH：作为参照检测cDNA质量；KYSE520、KYSE140、KYSE450、KYSE410、COLO680N、TE13、KYSE150为人的食管癌细胞系名称2.2食管癌细胞中JAM3基因启动子区甲基化情况2.2.1对照组DNA对甲基化特异性PCR的引物及体系进行验证我们应用JAM3基因特异性的甲基化的引物进行PCR扩增之后，MSP检测硫化后IVD和NL，结果显示：硫化后IVD为甲基化所对应的清晰明亮条带，硫化后NL无甲基化对应条带；JAM3基因特异性的非甲基化的引物进行PCR扩增之后，MSP检测硫化后IVD和NL，结果显示：仅以硫化后的NL为非甲基化清晰明亮条带，硫化后IVD无非甲基化所对应的条带出现。阴性对照即双蒸馏水中无任何条带出现（见图2.2）。上述结果表明：JAM3的MSP引物具有特异性，反应体系无污染。图2.2MSP检测对照组DNAJAM3基因启动子区甲基化情况IVD：体外甲基化DNA；ddH2O：双蒸馏水；NL：正常人外周血淋巴细胞DNA；M：甲基化；U：非甲基化；

262.2.2食管癌细胞系中JAM3基因启动子区甲基化情况本实验所应用MSP技术检测JAM3基因启动区在食管癌细胞系中甲基化情况。MSP检测结果示：JAM3基因启动子区在细胞KYSE520、KYSE140、KYSE450表现为非甲基化；在细胞KYSE150、KYSE410、TE13、COLO680N中呈完全甲基化状态(见图2.3)。图2.3MSP检测食管癌细胞系JAM3基因启动子区甲基化情况IVD：体外甲基化DNA；ddH2O：双蒸馏水；NL：正常人外周血淋巴细胞DNA；M：甲基化；U：非甲基化；KYSE520、KYSE140、KYSE450、KYSE410、COLO680N、TE13、KYSE150为人的食管癌细胞系名称2.2.3正常食管黏膜中JAM3基因启动子区甲基化状态本研究应用MSP技术对5例正常食管黏膜组织中JAM3基因启动子区的甲基化状态进行检测，结果显示正常食管黏膜组织中JAM3均为非甲基化，排除了JAM3基因甲基化的组织特异性(见图3.1)。图3.1MSP检测正常食管粘膜组织中JAM3基因启动子区域的甲基情况IVD：体外甲基化DNA；ddH2O：双蒸馏水；NL：正常人外周血淋巴细胞DNA；EN1-EN5：正常食管黏膜组织；M：甲基化；U：非甲基化


本文编号：3051738