慢病毒介导的CRISPR/Cas9敲除TGF-β1基因及其对鹿茸软骨细胞的影响
发布时间：2021-02-26 21:05
鹿茸是哺乳动物中极为特殊的骨质器官,它以惊人的生长速度发挥其周期性再生的能力,并且通过割茸创伤的无疤痕愈合,展现了其强大的免疫功能,使之成为各科研领域广为推崇的研究模型。鹿茸的发生与再生是多方面因素的合力所共同实现的,迄今为止,人们尚未能完全破解鹿茸发育的调控网络。转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）是一类多功能的生长因子,对细胞具有复杂的调控作用。已有研究表明,TGF-β及其受体在鹿茸顶端有大量表达,但其功能性研究却少有报道。因此,探究TGF-β在鹿茸快速生长阶段的重要作用成为本研究的主要目的。本研究利用生物信息学软件,对克隆得到的梅花鹿TGF-β1基因核苷酸序列及氨基酸序列相似性百分率、基因编码蛋白质的理化性质、翻译后修饰位点及蛋白质的二级结构进行了预测,通过免疫组化分析了TGF-β1在鹿茸顶端不同组织的相对表达强度,表明TGF-β1在软骨层中表达水平最高,其次为间充质层和真皮层。为探究TGF-β1在鹿茸软骨细胞中的功能,本试验利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除鹿茸软骨细胞中的TGF-β1基因。首先,针对梅花鹿TGF-β1序列...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TGF-β/Smad信号通路图
位点对 pre-crRNA 进行加工。另外，CnsⅠ和 RNase Ⅲ核酸酶也参与 pre-crR剪切过程[67]。目前的 CRISPR/Cas9 通常用人工设计的 gRNA（guide RNANA/crRNA复合物，从而将CRISPR/Cas9系统简化成Cas9蛋白和gRNA两个组RISPR/Cas9 的作用机理可分为三个阶段：适应、表达和干扰[69, 70]（图 3.1）侵时，CRISPR/Cas 系统首先产生与靶序列对应的 RNA 序列，该序列识别病 PAM 区，并与其 DNA 互补结合，在前导序列的启动下，转录形成 pre-crrRNA借助tracrRNA、CnsⅠ、RNaseⅢ和Cas9蛋白，经过两步剪切，成为成熟的c crRNA 先与 tracrRNA 上部分互补的区域形成双链 RNA，再与 Cas9 蛋白结核糖核蛋白复合物（CRISPR ribonu-cleoprotein，crRNP）。crRNA 能够与外异性地结合，并将 DNA 双链解开，形成 R 环结构，使 crRNA 与互补链杂交Cas 内切酶在特异位点完成对基因组的精确切割，形成 DNA 双链断裂（double, DSB）。最终，发生 DSB 的 DNA 则利用细胞自身的修复机制，对 DNA 进[71, 72]。
1.1 总 RNA 的琼脂糖凝胶电rose gel electrophoresisPCR 扩增结果A 为模板，通过 PCR 扩p 左右的位置出现特异性1,0800 bp00 bp50 bp00 bp50 bp00 bpM 1
【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子-β1-Smads信号通路在肝星状细胞凋亡中的作用[J]. 廖宝斌,吴雄健,刘远锦. 医疗装备. 2018(17)
[2]CRISPR-Cas9基因编辑系统研究进展[J]. 孙伟,刘杉杉. 动物医学进展. 2018(08)
[3]CRISPR-Cas9技术在遗传性疾病基因治疗中的研究进展[J]. 梅雯,孙美涛,王唯斯,柴蓓蓓,张若鹏,王仁凤,熊伟. 生物技术通讯. 2018(04)
[4]转化生长因子β信号与软骨的发生、发育和维持[J]. 张立智,李双,吴文美,张世民. 中华骨与关节外科杂志. 2018(07)
[5]CRISPR系统中Cas蛋白的分类及作用机制[J]. 冯欢欢,单彩龙,李金月,陆佳静,王茜璐,沈沁浩,焦红梅,阴银燕,孔桂美,郭停停,李国才. 中国病原生物学杂志. 2018(06)
[6]转化生长因子-β影响骨性关节炎发生发展作用机制的研究进展[J]. 钟庆,贾兆锋,卢敏强,徐晓,段莉,王大平. 国际骨科学杂志. 2018(03)
[7]CRISPR/Cas9在肿瘤治疗中的研究进展[J]. 吕宝北,赵鹏翔,张鑫,马雪梅,谢飞. 生物技术进展. 2018(03)
[8]CRISPR/Cas9在生物医学疾病模型中的应用[J]. 许文豪. 现代农业科技. 2018(09)
[9]TGF-β1介导的Smad通路在肾脏纤维化中的作用及机制[J]. 赵亚亚,钟成,李悦,宋伟伟,赵卫红. 解放军预防医学杂志. 2018(04)
[10]CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术及研究进展与应用[J]. 邢国杰,李桐,郑慧瑾,张玲,姜晓坤. 东北农业科学. 2017(06)
博士论文
[1]TGF-β1及其受体信号通路调控氟骨症骨转换机制[D]. 杨晨.吉林大学 2017
硕士论文
[1]TGF-β1在奶牛乳腺纤维化过程中的作用及分子机制[D]. 陈青.西北农林科技大学 2017
[2]MiRNA-19a和miRNA-19b对梅花鹿鹿茸组织中TGF-βRⅡ调控作用的研究[D]. 闫语多.吉林农业大学 2017
[3]TGF-β/Smads信号通路在雏鸡肠道损伤中的作用研究[D]. 张磊.河南工业大学 2016
[4]TGF-β家族及其受体在梅花鹿茸角中的表达与调节[D]. 韩玉帅.吉林大学 2011
[5]梅花鹿转化生长因子β1基因多态与产茸性状的相关性研究[D]. 陈斌.黑龙江八一农垦大学 2011
本文编号：3053172
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TGF-β/Smad信号通路图
位点对 pre-crRNA 进行加工。另外，CnsⅠ和 RNase Ⅲ核酸酶也参与 pre-crR剪切过程[67]。目前的 CRISPR/Cas9 通常用人工设计的 gRNA（guide RNANA/crRNA复合物，从而将CRISPR/Cas9系统简化成Cas9蛋白和gRNA两个组RISPR/Cas9 的作用机理可分为三个阶段：适应、表达和干扰[69, 70]（图 3.1）侵时，CRISPR/Cas 系统首先产生与靶序列对应的 RNA 序列，该序列识别病 PAM 区，并与其 DNA 互补结合，在前导序列的启动下，转录形成 pre-crrRNA借助tracrRNA、CnsⅠ、RNaseⅢ和Cas9蛋白，经过两步剪切，成为成熟的c crRNA 先与 tracrRNA 上部分互补的区域形成双链 RNA，再与 Cas9 蛋白结核糖核蛋白复合物（CRISPR ribonu-cleoprotein，crRNP）。crRNA 能够与外异性地结合，并将 DNA 双链解开，形成 R 环结构，使 crRNA 与互补链杂交Cas 内切酶在特异位点完成对基因组的精确切割，形成 DNA 双链断裂（double, DSB）。最终，发生 DSB 的 DNA 则利用细胞自身的修复机制，对 DNA 进[71, 72]。
1.1 总 RNA 的琼脂糖凝胶电rose gel electrophoresisPCR 扩增结果A 为模板，通过 PCR 扩p 左右的位置出现特异性1,0800 bp00 bp50 bp00 bp50 bp00 bpM 1
【参考文献】：
期刊论文
[1]转化生长因子-β1-Smads信号通路在肝星状细胞凋亡中的作用[J]. 廖宝斌,吴雄健,刘远锦. 医疗装备. 2018(17)
[2]CRISPR-Cas9基因编辑系统研究进展[J]. 孙伟,刘杉杉. 动物医学进展. 2018(08)
[3]CRISPR-Cas9技术在遗传性疾病基因治疗中的研究进展[J]. 梅雯,孙美涛,王唯斯,柴蓓蓓,张若鹏,王仁凤,熊伟. 生物技术通讯. 2018(04)
[4]转化生长因子β信号与软骨的发生、发育和维持[J]. 张立智,李双,吴文美,张世民. 中华骨与关节外科杂志. 2018(07)
[5]CRISPR系统中Cas蛋白的分类及作用机制[J]. 冯欢欢,单彩龙,李金月,陆佳静,王茜璐,沈沁浩,焦红梅,阴银燕,孔桂美,郭停停,李国才. 中国病原生物学杂志. 2018(06)
[6]转化生长因子-β影响骨性关节炎发生发展作用机制的研究进展[J]. 钟庆,贾兆锋,卢敏强,徐晓,段莉,王大平. 国际骨科学杂志. 2018(03)
[7]CRISPR/Cas9在肿瘤治疗中的研究进展[J]. 吕宝北,赵鹏翔,张鑫,马雪梅,谢飞. 生物技术进展. 2018(03)
[8]CRISPR/Cas9在生物医学疾病模型中的应用[J]. 许文豪. 现代农业科技. 2018(09)
[9]TGF-β1介导的Smad通路在肾脏纤维化中的作用及机制[J]. 赵亚亚,钟成,李悦,宋伟伟,赵卫红. 解放军预防医学杂志. 2018(04)
[10]CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术及研究进展与应用[J]. 邢国杰,李桐,郑慧瑾,张玲,姜晓坤. 东北农业科学. 2017(06)
博士论文
[1]TGF-β1及其受体信号通路调控氟骨症骨转换机制[D]. 杨晨.吉林大学 2017
硕士论文
[1]TGF-β1在奶牛乳腺纤维化过程中的作用及分子机制[D]. 陈青.西北农林科技大学 2017
[2]MiRNA-19a和miRNA-19b对梅花鹿鹿茸组织中TGF-βRⅡ调控作用的研究[D]. 闫语多.吉林农业大学 2017
[3]TGF-β/Smads信号通路在雏鸡肠道损伤中的作用研究[D]. 张磊.河南工业大学 2016
[4]TGF-β家族及其受体在梅花鹿茸角中的表达与调节[D]. 韩玉帅.吉林大学 2011
[5]梅花鹿转化生长因子β1基因多态与产茸性状的相关性研究[D]. 陈斌.黑龙江八一农垦大学 2011
本文编号：3053172
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3053172.html
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