IRF3基因敲除猪肾上皮细胞系的构建
发布时间：2021-03-01 18:31
天然免疫是天然免疫系统为自我成分与非自我成分的区分识别奠定了免疫应答与调控的基础,干扰素调节因子3（Interferon regulatory factor3,IRF3）是干扰素调节因子家族的主要成员之一,也是天然免疫信号通路中重要的干扰素调节因子,当DNA病毒感染时可激活STING/TBK1/IRF3天然免疫信号通路,最终激活Ⅰ型干扰素（Type Ⅰ interferon,IFN）的表达。本试验使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IRF3基因稳定敲除猪肾上皮PK15细胞系。构建pIRF3-sgRNA重组质粒与慢病毒包装载体共转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15猪肾上皮细胞,经嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7酶切鉴定筛选基因编辑效率较高的多克隆细胞,然后通过有限稀释法获得PK15-IRF3-/-单克隆稳定细胞系。为验证IRF3基因稳定敲除细胞系是否构建成功,首先使用荧光显微镜和流式细胞术观察PRV-GFP病毒在感染PK15-WT以及PK1 5-IRF3-/-细胞后0h、6h、12h、24 h、36h、48 h病毒复制的差异,其次TCID50检测P...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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的ｓｓＲＮＡ切割，从而使病毒起始阶段受到影响导致??蛋广１多肽链合成受附，从而能够抑制病毒蛋白的转录合成。同时，ＲＮａｓｅ?Ｌ可切割部分自身??的ｍＲＮＡ也可以形成小ＲＮＡ，这我小的ＲＮＡ激活ＲＩＧ－丨和ＭＤＡ－５等信号通路，从而诱导丨ＦＮ??生成及抑制病毒复制＠１。??ｎ?？?ｐ??ＯＭｇｏＡ?丄?Ａｃｔｉｖｅ??＾?ｓｒｒ?？??Ａｃｔｉｖｅ?｜??ＣＳＳＳ?（Ｗ）丄??个?〉Ｔｒｓｎｖｔｏｔｌｏｎ??ｒ—＞?ＩＲｆ?７?ｌｎｌ？ｒｆ＊ｒｏｎ??＿Ｊ???图３?ＯＡＳ介导的ＲＮａｓｅ?Ｌ信号通路ｍ??Ｋｉｇ．３?ＯＡＳ?ｍｅｄｉａｔｅｄ?ＲＮａｓｅ?Ｌ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?１５５１??１．４．３．５丨ＳＧＩ?５信号通路??ＩＦＮｉ秀导产Ｕ「多类抗病得ａａ＇ｍ中ＩＳＧ就足较为？耍的类，其中丨ＳＧ１５足丨ＦＮ诱导能??够的抑制病冉效成较为不＋＿Ｈ要作用的抗病＿蛋闩？虽然在很多年前就Ｗ科学家克隆出丨ＳＧ１５??描Ｗ，其具Ａ抗病诉效应足近年来Ｉ被人们所认知，但是其抗病毒机制尚未研宂清楚。研究??农明：ＩＳＧ１５＂］？促进病毐介导的丨ＦＮ调节因子３激活，从而提高ＩＦＮ－Ｐ的释放与其抗病毒效果??相反，磷酸＿２（：－０：丨：要利用调拧转化牛长因子－Ｐ?（ＴＧＦ－｜３）活化和激酶磷酸化，而ＩＳＧ１５??可以和蛋丨１磷酸？２Ｃ－Ｐ结合特异性竞争结果，达到后负向调控该机制进而增强ＮＦ－ｋＢ信号传??导和ＩＦＮ站丨用表达??８??
本文编号：3057858
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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