松材线虫madd-4基因表达特性与胚胎期功能验证研究

发布时间：2021-03-02 00:43

　　松材线虫病是一种由松材线虫引起的检疫性病害。前期研究发现,蓝光可以显著地抑制松材线虫的胚胎发育;进一步研究表明,在蓝色光照条件下,很多与代谢有关的基因表达量显著下调,其中madd-4基因的下调幅度尤为显著。在上述研究的基础上,本文以madd-4基因为研究对象,克隆了madd-4基因,分析该基因的进化地位;构建了madd-4基因相应的质粒表达载体,通过组织原位杂交和转基因显微注射研究,阐明其在松材线虫整个生命周期中的表达模式;通过RNAi技术验证其在胚胎期的功能作用。研究结果不仅能够阐明madd-4基因在松材线虫胚胎发育过程中的调控作用,为揭示光照抑制松材线虫种群增长的机理提供基础,还能够为研制新型杀线剂和设计特异性的松材线虫病防控措施提供新的思路,同时也能为其它高等动物的胚胎发育研究提供一定的参考。本文主要研究结果如下:一、madd-4基因在结构上与秀丽隐杆线虫相似,均有madd-4-long和madd-4-short两种不同形式的转录本,两种线虫的两个转录本均共享madd-4-short的第2-10个外显子,说明该基因在两种线虫中可能具有相同的调控功能。二、in situ原位杂交和转... 

【文章来源】：浙江农林大学浙江省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

秀丽隐杆线虫madd-4同源异构体与果蝇和人类同源蛋白的比较分析

图 2 松材线虫与秀丽隐杆线虫 madd-4 基因结构比较分析Figure 2 Structural Comparison of madd-4 in B. xylophilus and C. elegans利用 DNAMAN 软件对松材线虫 madd-4 基因所编码的氨基酸序列与秀丽隐杆线虫该蛋白的氨基酸序列进行多重序列比对，发现两者之间具有高度的重复性（见图 3）进一步暗示 madd-4 基因功能在松材线虫和秀丽隐杆线虫上可能具有高度的相似性。C. elegans madd-4

3 实验结果与分析MADD-4 蛋白功能位点分析结果表明，松材线虫和秀丽隐杆线虫具有高度的相似性（见图 4）。由图 4 可以看出，松材线虫 MADD-4A 蛋白的功能位点包含 7 个血小板反应蛋白 TSP 重复基序与 1 个 IG 免疫球蛋白域；松材线虫 MADD-4B 蛋白的功能位点包含 5 个血小板反应蛋白 TSP 重复基序与 1 个 IG 免疫球蛋白域，MADD-4A和 MADD-4B 均不含 PLAC 结构域，这与模式线虫 MADD-4 蛋白的功能位点存在很高的相似性，进一步表明 MADD-4 蛋白的功能在松材线虫和秀丽隐杆线虫上具有高度的相似性。


本文编号：3058272