油脂降解菌的筛选及关键基因克隆

发布时间：2021-03-02 02:19

　　动植物油脂均以甘油三脂的形式广泛存在于动植物体内和自然环境中,同时也是环境水体油污染的重要组分。当今社会,由于餐厨垃圾等生活垃圾排放量的逐年递增,餐饮废弃油脂的降解处理和相应的环境问题的治理越来越受到重视。在一些生物体内,甘油三酯经过酯酶降解后,可以通过乙醛酸途径转化为琥珀酸,从而进入其他生物大分子的生成代谢途径。因此,获得乙醛酸循环关键酶基因就成为构建油脂单一碳源高效降解菌株的关键。本研究从山西屠宰场污水排放处的污泥中,富集筛选得到一株具有油脂降解能力的菌株,其生理生化鉴定和16SrRNA基因序列同源性分析表明,实验菌株为一株革兰氏阴性菌,属于无色杆菌属（Achromobacter sp.）。通过使用紫外分光光度仪和液相色谱仪测定菌株的降解特性,结果表明:（1）实验菌株在72h左右对橄榄油的降解率可以达到85%。（2）菌株降解油脂的最适pH条件为7.5,最适温度条件为35℃。（3）菌株可以在pH值低于9的碱性环境中保持较高降解率,同时对低于40g/L的盐浓度具有耐受性。通过同源克隆得到了关键酶异柠檬酸裂解酶和苹果酸合酶基因序列,生物信息学分析结果表明:（1）异柠檬酸裂解酶和苹果酸合酶... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各菌株对橄榄油降解率

中国农业科学院硕士学位论文第二章油脂降解菌株的筛选及鉴定9M图2-216sRNA提取结果电泳图Fig.2-2Electrophoresisof16SRNAextractionresults实验菌株16SrRNA基因序列测序结果在NCBI上比对分析，部分分析结果见于表2-3，从分析结果可以看出，与YZ-3菌株的16SrRNA基因序列比对相似性较高的菌株均属于Achromobactersp。由系统发育树（图2-3）可以看出，与实验菌株聚为一支的菌属为Achromobacterpulmonis，结合Biolog试验分析结果，推断YZ-3实验菌株为一株无色杆菌（Achromobactersp.）并将其编号为fd-1。表2-3实验菌株16SrRNA基因序列的BLAST分析部分结果Table2-3TheBLASTanalysisresultof16SrRNAgenesequenceBacteriumstrainsSequenceID.IdentityAchromobacterpulmonisstrainR-16442NR_117644.11419/1427(99%)AchromobacterinsuavisstrainLMG26845NR_117706.11412/1427(99%)AchromobacterxylosoxidansstrainHugh2838NR_044925.11411/1427(99%)AchromobacterdolensstrainLMG26840NR_117709.11410/1427(99%)AchromobacterxylosoxidansstrainNBRC15126NR_113733.11414/1427(99%)20001000750500

中国农业科学院硕士学位论文第三章油脂降解菌株的降解特性11第三章油脂降解菌株的降解特性3.1材料与方法3.1.1实验材料与试剂3.1.1.1实验仪器高效液相色谱仪（Angilent公司）3.1.1.2实验药品正己烷、橄榄油、乙腈、异丙醇、氢氧化钠、盐酸、氯化钠、花生油、大豆油、芝麻油、猪油。3.1.2实验方法3.1.2.1液相色谱检测方法建立使用布氏漏斗过滤乙腈和异丙醇作为液相色谱检测的流动相，首先以橄榄油标准品和甘油标准品确定检测方法以及两者的出峰时间范围与大致峰形，随后通过绘制浓度-峰面积标准曲线。最终确定液相色谱检测参数为：流动相：乙腈：异丙醇（V:V）=1:1，上样量为5uL，流速0.8mL/min，柱温30℃。使用的色谱柱为ZorbaxEclipsePlusC18，通过极管阵列复合波长检测器进行检测，检测波长为293nm。标准品橄榄油在此液相色谱条件下的色谱图如图3-1所示，橄榄油标准品的浓度-峰面积标准曲线以及标准方程如图。图3-1标准品橄榄油的液相色谱图Fig.3-1Liquidchromatogramofstandardoliveoil


本文编号：3058420