小鼠FcγRⅡB基因重组腺病毒的构建及其对巨噬细胞分泌IL-10的影响

发布时间：2021-03-04 16:47

　　利用Ad-Max腺病毒载体系统包装含小鼠FcγRⅡB基因的重组腺病毒;采用改进的半数组织细胞感染量(TCID₅₀)方法测定腺病毒滴度;以感染复数（MOI）为500的病毒量感染永生化小鼠骨髓来源的巨噬细胞（iBMDM）,荧光显微镜观察细胞中GFP的表达,并用流式细胞术检测FcγRⅡB基因在细胞中的表达; ELISA检测FcγRⅡB蛋白对脂多糖（LPS）刺激后iBMDM细胞分泌IL-10的影响。结果表明:重组腺病毒质粒pHBAd-MCMV-GFP-FcγRⅡB构建成功;在HEK293细胞中成功包装和扩增了重组腺病毒和空载体腺病毒,滴度分别为1×10¹⁰和2×10¹⁰ pfu·mL^-1;腺病毒感染iBMDM细胞72 h后,约60%的细胞表达GFP;流式细胞术结果显示, FcγRIIB膜蛋白在iBMDM细胞上高表达; ELISA结果显示, FcγRⅡB提高LPS刺激后iBMDM细胞上清液中IL-10含量。这一研究提示FcγRⅡB能抑制巨噬细胞炎症反应。 

【文章来源】：扬州大学学报(农业与生命科学版). 2020,41(05)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

重组腺病毒质粒pHBAd-MCMV-GFP-

将腺病毒感染iBMDM细胞, 24 h后约10%细胞表达GFP (图略), 48 h后约30%细胞表达GFP (图2.c、e), 72 h后约60%细胞表达GFP (图2.d、f)。未感染腺病毒的iBMDM细胞24、48和72 h后均未见绿色荧光(其中72 h未激发和激发荧光见图2.a、b)。腺病毒感染72 h后的细胞,经过封闭液孵育和荧光抗体染色后,流式结果表明,重组腺病毒组FcγRⅡB的平均荧光强度(MFI)是空载体腺病毒组的2.64倍(图3), 说明重组腺病毒感染后, FcγRⅡB膜蛋白在iBMDM细胞上高表达。图3 腺病毒感染iBMDM细胞后流式细胞术检测FcγRIIB的表达

腺病毒感染iBMDM细胞后流式细胞术检测FcγRIIB的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]表达羊口疮病毒B2L基因重组腺病毒的构建及鉴定[J]. 王勇,杨侃侃,王元红,俞赵荣,潘飞,崔佣楸,苏莉,钟灵毓,徐前明,蒋书东,李永东.  扬州大学学报(农业与生命科学版). 2017(03)
[2]弓形虫ROP18重组腺病毒载体的构建及其对神经干细胞C17.2凋亡的影响[J]. 张贤,甘小凤,程正阳,都建,罗庆礼,沈继龙,余莉.  中国人兽共患病学报. 2016(03)



本文编号：3063555