刚毛柽柳ThABF2基因耐盐功能研究

发布时间：2021-03-05 07:43

　　ABF/AREB（ABRE-binding facto/ABA-response element binding factor）蛋白是广泛存在于植物中的一类转录因子,属于bZIP类转录因子的A亚族,主要在植物生长发育等方面具有重要的作用。本研究从刚毛柽柳（Tamarix hispida）转录组数据中鉴定出一条可能与盐胁迫应答相关的ABF基因,命名为ThABF2,该基因开放读码框（ORF）全长1110 bp,编码370个氨基酸,相对分子质量82.3kDa,理论等电点（PI）为5.02。构建pBI121-GFP-ThABF2载体,亚细胞定位结果表明ThABF2蛋白定位在细胞核中。构建pGBKT7-ThABF2载体,转化Y2H酵母感受态细胞,通过SD/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal培养基筛选检测显示ThABF2转录因子具有转录激活活性。为了研究ThABF2基因的耐盐功能,构建了重组pROKⅡ-ThABF2和pFGC5941-ThABF2基因,进行刚毛柽柳瞬时转化以获得瞬时过表达和抑制表达ThABF2基因刚毛柽柳苗,同时以pROKII瞬时侵染刚毛柽柳作为对照。在NaCI胁迫下,分... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ＰＣＲ扩增基因??

ａ?（ＸＰ＿０１５８７６２６２．１）；?ＣｃＡＢＦ：?Ｔ＾Ｓ?Ｃａｊａｎｕｓ?ｃａｊａｎ?（ＸＰ＿０２０２３１８７８．１）；?ＭｄＡＢＦ＇Ｍ％．?Ｍａｌｕｓ??（ｉ■咖７？ｃ＾（Ｒ＾Ｈ２３７５５？ｌ）；Ｃ７”Ｊ５Ｆ：南瓜Ｃｗ（：ｗｒ６／／＾７ｗａｓｃ／２＾７＾７（ＸＰ＿０２２２３２７３２？ｌ）；ＱＬ４及Ｆ：小果咖啡??（ＸＰ＿０２７０７２７２８．１）；?芝麻?ｚ＞＾／ｃｗｍ?（ＸＰ＿０１１０６２２８５．１）；粗线框部分为?４??个保守的磷酸化位点（Ｃ１－Ｃ４）和ｂＺＩＰ结构域??图２－４?ＡＢＦ蛋白的多序列比对??＂丨丨■酬■■…—－????ＣｍＡＢＦ????ＺｊＡＢＦ????Ｉ??Ｐ＞ｂＡＢＦ????１????ＭｄＡＢＦ???－?ＣｃＡＢＦ????ＳＩＡＢＦ????ｐ－—＂－＂—＂＂—＂＂—＂＂＂＂—?｜??ＮｓＡＢＦ????Ｉ??ＣａＡＢＦ???ＡＨｉＡＢＦ２????＿■＿＿■丨丨關ＳｏＡＢＦ????ｆ?????ＢｖＡＢＦ??１?ＣｑＡＢＦ??图２－５几种ＡＢＦ植物蛋白同源序列的系统进化树分析??＿１５＿??

?东北林业大学硕士学位论文???２．３．４刚毛柽柳基因的亚细胞定位??成功构建含ＧＦＰ载体的７７？ＡＳＦ２－ＧＦＰ重组基因，利用基因枪法将７７／ＡＳＦ２－ＧＦＰ基因??和ＰＢＩ１２１－ＧＦＰ基因瞬时转化到洋葱表皮，其中以ＰＢＩ１２１－ＧＦＰ基因为对照，结果如图??２－６所示：??Ｄ?Ｅ?Ｆ??ＡＤ：?ＧＦＰ荧光场；ＢＥ：明场；ＣＦ：复合场??图２－６?７ＭＳＦ２基因的亚细胞定位??从上图中可以看到，ＰＢＩ１２卜ＧＦＰ在洋葱表皮细胞的细胞质和细胞核中都有表达，??ＴＴ７ＡＢＦ２－ＧＦＰ只在洋葱表皮细胞核内有表达，表明转录因子定位在细胞核内。??２．３．５?ＴｈＡＢＦ２转录因子转录激活活性分析??２．３．５．１?ｐＧＢＫＴ７－ｍ４５Ｆ２?载体的构建??以ｐＭＤ１８－Ｔ－质粒为模板，ＰＣＲ扩增带有同源序列的的基因片段，??将该基因通过连接、转化构建到ＰＧＢＫＴ７载体上，选取条带长度正确且单一的菌液进行??测序，测序结果与７７Ｍ５Ｆ２基因序列完全一致，说明ｐＧＢｉｃｎ－ｒ／＾＾ｇｍ载体构建成功??（如图２－７）。??－１６－??


本文编号：3064842