猪CCAR1基因的表达规律及其调控细胞增殖的研究

发布时间：2021-03-08 00:43

　　细胞增殖的过程是高度严谨和复杂的,受到细胞内外多种因素的调控。CCAR1（Cell-Cycle and Apoptosis Regulator 1）基因是新发现的一类转录调控因子,属于细胞核周磷酸蛋白,该基因与细胞增殖密切相关。在本研究中,采用分段扩增的方法克隆CCAR1基因的CDS区序列,并进行生物信息学分析;分离培养了猪肌源性前体脂肪细胞,在PK15细胞和猪肌源性前体脂肪细胞中研究了CCAR1基因的亚细胞定位,探究CCAR1的表达情况;使用qRT-PCR技术检测CCAR1基因在马身猪和大白猪的8个组织,包括心脏、肝脏、皮下脂肪、脾脏、肾脏、小肠、小脑和肌肉中的表达谱,以及在0、3、6月龄的腰大肌、背最长肌和股二头肌中的表达,目的是了解CCAR1基因的表达规律;成功构建了CCAR1基因的CRISPR/Cas9敲除载体,将重组载体转染至293T细胞和PK15细胞观察转染效率,并进行qRT-PCR、Western Blotting以及CCK8（cell counting kit 8）检测,检测CCAR1基因mRNA和蛋白的表达情况以及与细胞增殖相关基因的表达量,为研究CCAR1基因的功能... 

【文章来源】：山西农业大学山西省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CCAR1基因的克隆

-16-图2-2CCAR1基因核苷酸序列与预测氨基酸序列Fig.2-2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCCAR1gene2.1.2CCAR1生物信息学分析NCBI在线软件预测CCAR1蛋白的保守结构域共有5个，分别为S1-Like结构域、SPORsuper结构域、DBC1结构域、SAP结构域以及SMC-Nsuper结构域（图2-3）。CCAR1蛋白共包含1152个氨基酸，分子量约为131.9kDa，等电点为5.57。跨膜结构预测发现跨膜区transmbrane在outside的上方，未跨过inside和outside，因此该蛋白不属于跨膜蛋白（图2-4）。磷酸化位点结构表明，CCAR1蛋白存在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸共三个磷酸化位点，发生在三个位置上磷酸化修饰的氨基酸残基的数量分别为19、13和7（图2-5）。亚细胞定位结果表明82.6%定位于细胞核，8.7%定位于细胞质膜，8.7%定位于细胞骨架。CCAR1核苷酸序列与人类、小鼠、绵羊、野牛、双峰骆驼、小矛鲸以及抹香鲸的同源性分别为93.89%、91.05%、94.88%、94.80%、95.98%、95.85%和

CCAR1跨膜预测结果


本文编号：3070102