沉默ARK5基因逆转胃癌多药耐药细胞SGC7901/DDP耐药性的研究

发布时间：2021-03-12 11:26

　　目的:在细胞水平研究ARK5与胃癌多药耐药的关系,明确沉默ARK5基因能否有效逆转胃癌多药耐药细胞SGC7901/DDP的耐药性。方法:1.设计针对ARK5基因的RNA干扰（RNA interference,RNAi）序列及阴性对照（negative control,NC）序列,并已完成对LV-ARK5-RNAi重组慢病毒载体和阴性重组慢病毒载体的构建;2.用带荧光（GFP）的阴性重组慢病毒载体感染SGC7901/DDP细胞,通过在荧光倒置显微镜下观察来挑选出最优的感染条件;3.采用Western Blot技术测定ARK5在SGC7901细胞和顺铂（DDP）诱导的SGC7901/DDP细胞中的蛋白表达量,并验证构建的慢病毒对ARK5靶点的干扰效率;4.用顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、多西他赛（DR）、阿霉素（ADR）四种结构和机制各异的抗肿瘤药物分别处理SGC7901、SGC7901/DDP、ARK5慢病毒感染组细胞SGC7901/DDP-shARK5、阴性病毒感染组SGC7901/DDPNC,经CCK8、克隆形成实验、流式细胞仪的检测其变化,观察沉默ARK5基因对SGC7... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写、全称及中文对照
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验主要材料
        2.1.1 细胞株和重组慢病毒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要试验用液的配置
        2.1.4 主要实验仪器和设备
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 重组慢病毒感染SGC7901/DDP预实验
        2.2.3 Western blot测定ARK5 蛋白表达的情况
        2.2.4 CCK比色法检测细胞存活率
        2.2.5 化疗药物的IC50 实验
        2.2.6细胞内阿霉素的蓄积和滁留实验
        2.2.7平板细胞克隆形成实验
        2.2.8 细胞凋亡检测
    2.3 数据处理
第3章 结果
    3.1 ARK5 在胃癌亲本细胞SGC7901 与胃癌多药耐药细胞SGC7901/DDP中蛋白的表达
    3.2 ARK5 重组慢病毒转染SGC7901/DDP细胞的条件
    3.3 ARK5 蛋白的RNA干扰效率
    3.4 干扰ARK5 的蛋白表达对胃癌细胞在不同抗肿瘤药物作用下存活率的影响
    3.5 干扰ARK5 蛋白的表达对化疗药物IC50 的影响
    3.6 干扰ARK5 的蛋白表达对胃癌细胞克隆形成能力的影响
    3.7 干扰ARK5 的蛋白表达对胃癌细胞凋亡的影响
    3.8 干扰ARK5 蛋白的表达对胃癌细胞中阿霉素的泵出率的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]胃癌多药耐药机制及研究进展[J]. 黄昊,杨星九,高苒.  中国医学科学院学报. 2016(06)
[2]Overcoming drug efflux-based multidrug resistance in cancer with nanotechnology[J]. Xue Xue and Xing-Jie Liang CAS Key Laboratory for Biomedical Effects of Nanomaterials and Nanosafety,National Center for Nanoscience and Technology of China,Beijing 100190,P.R.China..  癌症. 2012(02)

硕士论文
[1]KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药中的作用及机制研究[D]. 张慧.第四军医大学 2013



本文编号：3078222