异源表达德氏乳杆菌保加利亚亚种TCS1调控酸适应基因提高乳酸乳球菌NZ9000耐酸性

发布时间：2021-03-16 18:30

　　【目的】在乳酸乳球菌NZ9000中异源表达德氏乳杆菌保加利亚亚种中由双组分系统TCS1（JN675228/JN675229）调控的与酸适应相关基因,进而探究德氏乳杆菌保加利亚亚种应对酸胁迫的机制。【方法】通过逆转录聚合酶链式反应和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证由德氏乳杆菌保加利亚亚种TCS1调控的与酸适应相关基因中腺嘌呤磷酸核糖转移酶（aprt）、D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶（ddl）、寡肽ABC转运蛋白（oppDII）和延伸因子Ts（tsf）在乳酸乳球菌NZ9000中的表达情况。酸处理实验验证基因表达对宿主菌酸胁迫耐受能力的影响。并采用酵母双杂交验证双组分系统TCS1与表达的酸适应相关基因之间的互作关系及具体的互作部位。【结果】结果表明,乳酸乳球菌NZ9000中成功表达了aprt、ddl、oppDII和tsf。aprt、ddl基因使重组菌对酸胁迫的抗性分别提高了75倍和114倍。oppDII和tsf基因的表达对重组菌株的耐酸能力没有明显影响。酵母双杂交实验表明TCS1中的组氨酸蛋白激酶HPK1与Ddl之间存在相互作用,且HPK1-C结构域是二者相互作用的关键区域。【结论】ap... 

【文章来源】：微生物学报. 2020,60(11)北大核心

【文章页数】：17 页

【部分图文】：

表达质粒的构建

重组质粒酶切验证电泳图

耐酸调控相关基因RT-PCR产物的电泳图

【参考文献】：
期刊论文
[1]棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶的乳酸乳球菌表达[J]. 黄建飞,成丽丽,李娜,司丽芳,罗立新.  现代食品科技. 2014(05)

博士论文
[1]德氏乳杆菌保加利亚亚种CAUH1酸耐受机制的蛋白组学研究及抗酸胁迫基因Ldb0677和pyk的功能分析[D]. 翟征远.中国农业大学 2014



本文编号：3086413