志贺菌ipaH基因PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2021-03-17 20:37

　　为了掌握青海省4种食源性动物体内志贺菌的分布情况,针对志贺菌属侵袭性质粒抗原H基因（invasive plasmid,ipaH）设计1对特异性引物,建立志贺菌的PCR检测方法,优化反应体系,检测该方法的敏感性和特异性,并将该方法应用于临床样本检测。结果表明,建立的PCR方法能特异性扩增志贺菌ipaH基因,而沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌、变形杆菌等均未扩增出条带;最低检测限值为1.8 pg/μL。在临床样本检测中,100株疑似菌株的阳性率为62.00%,其中牦牛源75.00%（3/4）,鸡源35.29%（12/34）,羊源44.44%（8/18）,猪源88.64%（39/44）;新鲜鸡粪和羊粪的阳性率分别为91.67%（11/12）和90.91%（10/11）。这说明试验所建立的PCR方法具有良好的敏感性和特异性,可应用于志贺菌的实验室诊断;4种动物体内均不同程度带菌,在临床诊断和治疗时不可忽视该菌的致病作用。 

【文章来源】：安徽农业科学. 2020,48(21)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

特异性试验结果

用核酸测定仪测得DNA模板浓度为180 ng/μL,对不同稀释度的模板进行PCR扩增,当模板浓度达到1.8 pg/μL时可扩增出相应条带,由此可见该PCR检测方法最低可检出1.8 pg/μL的志贺菌DNA(图4)。2.4 临床样本检测

运用建立的PCR方法对100株疑似菌株进行检测,结果发现62株菌扩增出目的条带,检出率为62.00%。不同动物的检出率各不相同,牦牛源为75.00%(3/4),鸡源为35.29%(12/34),羊源为44.44%(8/18),猪源为88.64%(39/44),且猪源带菌率明显高于其他3种动物。对扩增阳性菌株进行测序,测序结果与鲍氏志贺菌(登录号CP026865.1)同源性达到96.81%、与痢疾志贺菌(登录号CP02678.1)同源性达到97.35%、与宋内氏志贺菌(登录号CP037997.1)同源性达到95.22%、与福氏志贺菌(登录号CP037996.1)同源性达到95.22%,证实该试验检出的阳性菌株为志贺菌(图 5～8)。2.4.2 粪样样本中志贺菌的PCR检测。

【参考文献】：
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博士论文
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硕士论文
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本文编号：3087683