肝癌相关抗原SMP30基因转染DC诱生CTL抗肝癌作用研究
发布时间：2021-03-18 21:27
目的:构建介导小鼠肝癌相关抗原SMP30基因的慢病毒重组子,探讨SMP30在基因水平致敏DC有效性及其诱生CTL体外抗HCC的作用。方法:（1）运用基因重组技术,将小鼠SMP30基因连接到带绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒表达载体LV5中,构建SMP30慢病毒重组子并转染小鼠DC,实验分为慢病毒空载体组（LV-control组）、SMP30慢病毒组（LV-SMP30组）、SMP30蛋白组（SMP30 Protein组）和空白对照DC组（DC组）,通过Western blot检测转染组SMP30的表达。（2）流式细胞术检测致敏后DC的表面分子在各组间的差异,判断SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。（3）ELISA检测致敏后各组DC上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量。（4）CD8+T细胞磁珠分选试剂盒从BALB/C小鼠脾脏的单细胞悬液中分选CD8+T细胞,然后通过流式细胞术检测CD8+T细胞纯度,再和上述各组DC细胞共孵育诱生CTL,用ELISA检测各组CTL上清液中IL-2、IFN-γ的分泌量。（5）将诱生的CTL与小鼠H22肝癌细胞共孵育,流式细胞术检测各组CTL对肝癌细胞的杀伤...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒滴度测定结果
C D图 2：两组慢病毒转染 DC 细胞后绿色荧光蛋白表达( 2. Expression of green fluorescent protein in DC celentivirus in two groups (×200).trol 组（LM）; B:LV-control 组（FLM）; C:LV-SMP30 组（LMern Blot 检测 SMP30 蛋白的表达P30 组和 LV-control 的 Western Blot 检测结均可在 36kD（GAPDH）和 33kD（SMP30）处胞的 GAPDH 内参条带基本相同。通过与 LV组条带更加明显，说明 LV-SMP30 组转染的 D
C D图 2：两组慢病毒转染 DC 细胞后绿色荧光蛋白表达(×200) 2. Expression of green fluorescent protein in DC cells translentivirus in two groups (×200).trol 组（LM）; B:LV-control 组（FLM）; C:LV-SMP30 组（LM）; D:LV-ern Blot 检测 SMP30 蛋白的表达P30 组和 LV-control 的 Western Blot 检测结果（图 均可在 36kD（GAPDH）和 33kD（SMP30）处出现阳性胞的 GAPDH 内参条带基本相同。通过与 LV-contro组条带更加明显，说明 LV-SMP30 组转染的 DC 细胞表
【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响[J]. 郑文,赵娟娟,朱顺飞,徐华林,雷良玉,卢佳,贾力,褚风云,王海嵘,徐林. 现代免疫学. 2016(05)
[2]2012年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,左婷婷,贾漫漫,夏昌发,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2016(01)
[3]全球肝癌流行概况[J]. 魏矿荣,彭侠彪,梁智恒,岑惠珊. 中国肿瘤. 2015(08)
[4]2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,曾红梅,邹小农,张思维,赫捷. 中国肿瘤. 2015(01)
[5]CD3/CD28免疫磁珠法体外扩增外周血T淋巴细胞[J]. 王云飞,王艺,王春荣,杨玉秀,姬新颖,张延瑞,韩双印. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(10)
[6]联合应用CD3/CD28单克隆抗体对小鼠T淋巴瘤细胞EL4活化的影响[J]. 娄强,张薇,刘广超,马远方. 中国免疫学杂志. 2013(06)
[7]两种方法分离小鼠脾原始T淋巴细胞效果比较[J]. 陈嵘祎,阿彩岭,周英,樊翌明. 中国热带医学. 2013(05)
[8]肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测[J]. 赵飞兰,晁耐霞,李日伦,莫发荣,黄天明,肖飞,谢小薰,罗国容. 中国现代医学杂志. 2011(26)
[9]衰老标记蛋白-30的表达与肝疾病的关系[J]. 莫发荣,李颀,何少健,罗彬,曾庆堂,谢小薰,罗国容. 解剖学报. 2007(05)
[10]Interferon γ Stimulates Cellular Maturation of Dendritic Cell Line DC2.4 Leading to Induction of Efficient Cytotoxic T Cell Responses and Antitumor Immunity[J]. Terence Moyana,Jim Xiang. Cellular & Molecular Immunology. 2007(02)
博士论文
[1]肝癌相关抗原KINECTIN基因的重组、表达及其致敏DC抗肝癌活性研究[D]. 赵飞兰.广西医科大学 2010
[2]HSP90和chk1在肝癌中的表达及在肝癌细胞凋亡中作用的研究[D]. 薛慧琴.广西医科大学 2009
[3]CCK-8对树突状细胞表型和功能成熟的影响及其信号转导机制[D]. 韩冬艳.河北医科大学 2008
本文编号：3088955
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
慢病毒滴度测定结果
C D图 2：两组慢病毒转染 DC 细胞后绿色荧光蛋白表达( 2. Expression of green fluorescent protein in DC celentivirus in two groups (×200).trol 组（LM）; B:LV-control 组（FLM）; C:LV-SMP30 组（LMern Blot 检测 SMP30 蛋白的表达P30 组和 LV-control 的 Western Blot 检测结均可在 36kD（GAPDH）和 33kD（SMP30）处胞的 GAPDH 内参条带基本相同。通过与 LV组条带更加明显，说明 LV-SMP30 组转染的 D
C D图 2：两组慢病毒转染 DC 细胞后绿色荧光蛋白表达(×200) 2. Expression of green fluorescent protein in DC cells translentivirus in two groups (×200).trol 组（LM）; B:LV-control 组（FLM）; C:LV-SMP30 组（LM）; D:LV-ern Blot 检测 SMP30 蛋白的表达P30 组和 LV-control 的 Western Blot 检测结果（图 均可在 36kD（GAPDH）和 33kD（SMP30）处出现阳性胞的 GAPDH 内参条带基本相同。通过与 LV-contro组条带更加明显，说明 LV-SMP30 组转染的 DC 细胞表
【参考文献】：
期刊论文
[1]微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响[J]. 郑文,赵娟娟,朱顺飞,徐华林,雷良玉,卢佳,贾力,褚风云,王海嵘,徐林. 现代免疫学. 2016(05)
[2]2012年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,左婷婷,贾漫漫,夏昌发,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2016(01)
[3]全球肝癌流行概况[J]. 魏矿荣,彭侠彪,梁智恒,岑惠珊. 中国肿瘤. 2015(08)
[4]2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,曾红梅,邹小农,张思维,赫捷. 中国肿瘤. 2015(01)
[5]CD3/CD28免疫磁珠法体外扩增外周血T淋巴细胞[J]. 王云飞,王艺,王春荣,杨玉秀,姬新颖,张延瑞,韩双印. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(10)
[6]联合应用CD3/CD28单克隆抗体对小鼠T淋巴瘤细胞EL4活化的影响[J]. 娄强,张薇,刘广超,马远方. 中国免疫学杂志. 2013(06)
[7]两种方法分离小鼠脾原始T淋巴细胞效果比较[J]. 陈嵘祎,阿彩岭,周英,樊翌明. 中国热带医学. 2013(05)
[8]肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测[J]. 赵飞兰,晁耐霞,李日伦,莫发荣,黄天明,肖飞,谢小薰,罗国容. 中国现代医学杂志. 2011(26)
[9]衰老标记蛋白-30的表达与肝疾病的关系[J]. 莫发荣,李颀,何少健,罗彬,曾庆堂,谢小薰,罗国容. 解剖学报. 2007(05)
[10]Interferon γ Stimulates Cellular Maturation of Dendritic Cell Line DC2.4 Leading to Induction of Efficient Cytotoxic T Cell Responses and Antitumor Immunity[J]. Terence Moyana,Jim Xiang. Cellular & Molecular Immunology. 2007(02)
博士论文
[1]肝癌相关抗原KINECTIN基因的重组、表达及其致敏DC抗肝癌活性研究[D]. 赵飞兰.广西医科大学 2010
[2]HSP90和chk1在肝癌中的表达及在肝癌细胞凋亡中作用的研究[D]. 薛慧琴.广西医科大学 2009
[3]CCK-8对树突状细胞表型和功能成熟的影响及其信号转导机制[D]. 韩冬艳.河北医科大学 2008
本文编号：3088955
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