鮸鱼两种免疫相关microRNA的靶基因验证及调控研究
发布时间：2021-03-20 19:07
在生物体的长期的进化过程中,为了抵抗外界病原体的感染,脊椎动物已经进化出了较完善的免疫系统。脊椎动物的免疫系统,是它们防御疾病的重要组成部分,可以分为先天性免疫系统（Innate Immunity System）和适应性或者获得性免疫系统（Adaptive or Acquired Immunity System）。Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）在生物体对病原体的鉴别的过程中,发挥着关键的作用。MicroRNAs（mi RNAs）是一种小的RNA分子,具有内源性的和非编码的特征,约含1825个核苷酸,能够在转录后水平上通过诱导靶基因mRNA的降解或者抑制蛋白质翻译的方式来调控各种生理过程。当机体感染病原体时,免疫细胞会通过模式识别受体特异性的识别病原体的组成部分并激活下游的信号通路,从而引起促炎症细胞因子和I型干扰素的产生。在本研究中通过对实验室利用高通量测序获得的鳗弧菌感染前后miRNA的转录组数据进行分析,筛选出了病原体感染相关的差异性表达的miRNA,对其中的几个mi RNA对Toll受体的靶标调控进行了研究,研究结论如下:...
【文章来源】：浙江海洋大学浙江省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-122的特征分析
第三章 结果与讨论在不同的时间点进行了具体的研究。与未感染鳗弧菌的情况下的 miR-122 的表达量相比，在其感染后 48 h，鮸鱼的 miR-122 的表达量下降了 0.013 倍。然而，与未感染的阴性对照进行比较，TLR14 的表达量强烈地升高，在鳗弧菌感染后的 48 h，大约上升了 11.85 倍，如图 3-2 所示。由此可知，在鳗弧菌感染的条件下，鮸鱼 miR-122 能够负性调控 TLR14 的表达量。miR-122 的表达量的下调，表明 miR-122 在病原体的感染条件下，可能参与对鳗弧菌的免疫方面的负性调控。为了进一步确认这种关键性的变化趋势，我们使用在 LPS 的刺激鮸鱼的巨噬细胞的条件下，来模拟进行体外的感染条件下，进一步地对 miR-122 和 TLR14 的表达量进行检测。与未感染 LPS 的细胞作为阴性对照相比较，在细胞感染 LPS 后的 3 h 和 6h 后，miR-122 的表达量是下降的，而 TLR14 的表达量是上升的，如图 3-3 所示。综上可以看出，在体外的感染性实验和在体内的攻毒的实验情况下，这些表达量的结果可以清楚地表明，miR-122 能够负性调控 TLR14 的表达量。
图 3-3 鮸鱼 miR-122(A) 和 TLR14 (B) 在 LPS 刺激鮸鱼巨噬细胞的表达图谱Fig.3-3 The time-course expression patterns of miR-122 (A) and TLR14 (B) in macrophages of miiuycroaker with LPS stimulation. Data are expressed as the mean ± SD (n = 3).3.1.4 双荧光素酶报告基因分析miRNA 对靶基因的调控作用是通过与其 3’UTR 区域的靶作用位点相结合来实现其负调控作用的。为了确定 TLR14 是否能够作为 miR-122 的直接靶基因，我们利用计算机软件分析数据库来对 miR-122 在 TLR14 3’UTR 非翻译区上的靶向结合位点进行了预测。也就是说，是将预测得到的“种子区域”的靶向结合区域进行了点突变，突变的序列过程如下图 3-4 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄鱼脾酪氨酸激酶的克隆与表达分析[J]. 王小龙,叶坤,王志勇,韩芳. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2017(06)
[2]has-miR-16在舌鳞癌中的生物学功能及分子机制研究[J]. 李琦,耿亚军,郭菁,鄂丽华,徐溢涵,金武龙. 中国实用口腔科杂志. 2017(06)
[3]水稻白叶枯病菌Ⅲ型效应物基因hpaF与毒力相关[J]. 刘国芳,蒋蓉,苏辉昭,牛祥娜,玉延华,姜伟,何勇强. 华南农业大学学报. 2015(05)
[4]牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因载体构建与活性检测[J]. 段美艳,李安宁,赵志东,王明明,昝林森. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(08)
[5]鱼类Toll样受体及其信号传导的研究进展[J]. 范泽军,邹鹏飞,姚翠鸾. 水生生物学报. 2015(01)
[6]Toll样受体信号转导的负调控机制研究进展[J]. 高明,敖越,栾新红. 动物医学进展. 2015(01)
[7]柑橘黄龙病菌外膜蛋白的诱导表达[J]. 高玉霞,卢占军,钟八莲,易龙,苏华楠,赵培娅,刘志芳,赖爱萍,夏宜林. 赣南师范学院学报. 2014(06)
[8]Toll样受体信号通路在宫颈高危HPV感染致癌过程中的相关功能[J]. 徐小仙,楼寒梅. 国际肿瘤学杂志. 2014 (11)
[9]Toll样受体信号传导通路及其免疫调节作用的研究进展[J]. 高明,敖越,栾新红,曹中赞. 中国预防兽医学报. 2014(04)
[10]TLR7和AP-1在基底细胞癌中的表达及意义[J]. 邓妮,高永良,赵恒光. 激光杂志. 2013(06)
本文编号：3091513
【文章来源】：浙江海洋大学浙江省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-122的特征分析
第三章 结果与讨论在不同的时间点进行了具体的研究。与未感染鳗弧菌的情况下的 miR-122 的表达量相比，在其感染后 48 h，鮸鱼的 miR-122 的表达量下降了 0.013 倍。然而，与未感染的阴性对照进行比较，TLR14 的表达量强烈地升高，在鳗弧菌感染后的 48 h，大约上升了 11.85 倍，如图 3-2 所示。由此可知，在鳗弧菌感染的条件下，鮸鱼 miR-122 能够负性调控 TLR14 的表达量。miR-122 的表达量的下调，表明 miR-122 在病原体的感染条件下，可能参与对鳗弧菌的免疫方面的负性调控。为了进一步确认这种关键性的变化趋势，我们使用在 LPS 的刺激鮸鱼的巨噬细胞的条件下，来模拟进行体外的感染条件下，进一步地对 miR-122 和 TLR14 的表达量进行检测。与未感染 LPS 的细胞作为阴性对照相比较，在细胞感染 LPS 后的 3 h 和 6h 后，miR-122 的表达量是下降的，而 TLR14 的表达量是上升的，如图 3-3 所示。综上可以看出，在体外的感染性实验和在体内的攻毒的实验情况下，这些表达量的结果可以清楚地表明，miR-122 能够负性调控 TLR14 的表达量。
图 3-3 鮸鱼 miR-122(A) 和 TLR14 (B) 在 LPS 刺激鮸鱼巨噬细胞的表达图谱Fig.3-3 The time-course expression patterns of miR-122 (A) and TLR14 (B) in macrophages of miiuycroaker with LPS stimulation. Data are expressed as the mean ± SD (n = 3).3.1.4 双荧光素酶报告基因分析miRNA 对靶基因的调控作用是通过与其 3’UTR 区域的靶作用位点相结合来实现其负调控作用的。为了确定 TLR14 是否能够作为 miR-122 的直接靶基因，我们利用计算机软件分析数据库来对 miR-122 在 TLR14 3’UTR 非翻译区上的靶向结合位点进行了预测。也就是说，是将预测得到的“种子区域”的靶向结合区域进行了点突变，突变的序列过程如下图 3-4 所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄鱼脾酪氨酸激酶的克隆与表达分析[J]. 王小龙,叶坤,王志勇,韩芳. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2017(06)
[2]has-miR-16在舌鳞癌中的生物学功能及分子机制研究[J]. 李琦,耿亚军,郭菁,鄂丽华,徐溢涵,金武龙. 中国实用口腔科杂志. 2017(06)
[3]水稻白叶枯病菌Ⅲ型效应物基因hpaF与毒力相关[J]. 刘国芳,蒋蓉,苏辉昭,牛祥娜,玉延华,姜伟,何勇强. 华南农业大学学报. 2015(05)
[4]牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因载体构建与活性检测[J]. 段美艳,李安宁,赵志东,王明明,昝林森. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2015(08)
[5]鱼类Toll样受体及其信号传导的研究进展[J]. 范泽军,邹鹏飞,姚翠鸾. 水生生物学报. 2015(01)
[6]Toll样受体信号转导的负调控机制研究进展[J]. 高明,敖越,栾新红. 动物医学进展. 2015(01)
[7]柑橘黄龙病菌外膜蛋白的诱导表达[J]. 高玉霞,卢占军,钟八莲,易龙,苏华楠,赵培娅,刘志芳,赖爱萍,夏宜林. 赣南师范学院学报. 2014(06)
[8]Toll样受体信号通路在宫颈高危HPV感染致癌过程中的相关功能[J]. 徐小仙,楼寒梅. 国际肿瘤学杂志. 2014 (11)
[9]Toll样受体信号传导通路及其免疫调节作用的研究进展[J]. 高明,敖越,栾新红,曹中赞. 中国预防兽医学报. 2014(04)
[10]TLR7和AP-1在基底细胞癌中的表达及意义[J]. 邓妮,高永良,赵恒光. 激光杂志. 2013(06)
本文编号：3091513
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3091513.html
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