糖化酶基因glaA缺失的黑曲霉产酶代谢组与转录组学研究

发布时间：2021-03-21 14:51

　　黑曲霉是重要的细胞工厂之一,广泛用于工业上各类酶制剂和有机酸的生产。以淀粉为原料的加工过程中,利用α-葡萄糖苷酶的转糖苷作用能生成低聚异麦芽糖。黑曲霉产α-葡萄糖苷酶时往往伴随着糖化酶而抑制其转苷能力,其代谢机制不明确。在本研究中,我们首先通过分子遗传手段构建糖化酶基因galA缺失的黑曲霉突变株,获得了α-葡萄糖苷酶活升高的菌株;其次在代谢组水平和转录组水平分析基因缺失导致的差异代谢物及转录本,构建差异代谢通路以确认黑曲霉产α-葡萄糖苷酶与糖化酶过程中关键因素;最后使用筛选到的关键代谢物进行添加培养,以验证本方法的有效性。首先利用已构建好的敲除表达盒galA1-N^R、N^R-galA2重新转化黑曲霉出发株HE01的原生质体,获得糖化酶基因缺失的△galA后,测定α-葡萄糖苷酶活和糖化酶活随时间的变化曲线,确定黑曲霉HE01和△galA代谢组和转录组分析的最适时期:在产酶发酵培养第168 h,两菌株的两种酶活均表现最高。其次选择最适时期的黑曲霉菌体快速冷冻一部分做代谢物制备,另一部分做RNA提取。一部分菌体采用真空冷冻干燥后甲醇水溶液进行少量多次... 

【文章来源】：深圳大学广东省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

淀粉加工过程

2.1 galA1-NR和 NR-galA2 片段的质粒 bp maker 1：galA1-NR片段的质粒 2 bands of 1% agarose gel with plasmid in plasmid including galA1-NR2: plasmid 敲除表达盒随机挑取 5 个进行菌落 PCR，以alA-MkF、galA-4R 扩增 NR-galA行过夜摇菌进行后续实验或保种

图 2.1 galA1-NR和 NR-galA2 片段的质粒提取00 bp maker 1：galA1-NR片段的质粒 2 ：NR-galA2tic bands of 1% agarose gel with plasmid including galA 1: plasmid including galA1-NR2: plasmid including gaalA 敲除表达盒落随机挑取 5 个进行菌落 PCR，以引物 galA galA-MkF、galA-4R 扩增 NR-galA2 序列，结进行过夜摇菌进行后续实验或保种。

【参考文献】：
期刊论文
[1]黑曲霉SH-2基因组中注释的7个α-葡萄糖苷酶基因的鉴定与表达分析[J]. 杨海燕,潘力,王斌.  现代食品科技. 2017(06)
[2]顶头孢霉中己糖激酶编码基因Achka的功能研究[J]. 苏豫,陈依军,车永胜,刘钢.  菌物学报. 2017(03)
[3]生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达[J]. 朱婧,刘海余,王青艳,米慧芝,朱绮霞,廖思明,秦艳,申乃坤,黄日波.  广西科学. 2016(01)
[4]Aspergillus nigerF-01生淀粉糖化酶基因的克隆与序列分析[J]. 孙海彦,黎娟华,刘恩世,彭明.  基因组学与应用生物学. 2015(02)
[5]黑曲霉糖化酶基因上游调控区的克隆与分析[J]. 徐欣,李杰.  生物技术. 2012(01)
[6]低聚异麦芽糖制备的研究进展[J]. 林亲录,符琼,周丽君.  食品工业科技. 2011(02)
[7]固定化α-葡萄糖苷酶的性质研究[J]. 彭志英,岳振峰,张学兵,徐建祥,赵谋明.  华南理工大学学报(自然科学版). 2001(07)

硕士论文
[1]黑曲霉产糖化酶合成培养基优化及代谢轮廓分析方法的初步探索[D]. 陈香粉.华东理工大学 2014
[2]黑曲霉糖化酶基因在酵母中克隆和表达[D]. 钱鹏.安徽工程大学 2012
[3]真菌代谢产物中促进纳他霉素合成的诱导子的研究[D]. 史强.江南大学 2010



本文编号：3093054