CRISPR/Cas9介导CPED1基因敲除载体活性的验证

发布时间：2021-03-23 03:29

　　试验旨在利用CRISPR/Cas9技术分别在鸡成纤维细胞DF-1和鸡胚胎干细胞（Em-bryomic stem cell,ESCs）上介导CPED1基因敲除,以期为后续研究CPED1基因功能提供技术依据。克隆CPED1基因全长;构建cas9/g RNA载体并转染DF-1和ESCs,经流式分选阳性细胞,采用T7E1酶切法选择活性最佳的敲除载体并分析其敲除效率;同时,对DF-1中的脱靶效率进行检测。结果成功克隆鸡CPED1基因,并构建3个cas9/g RNA载体;T7E1酶切结果表明cas9/g RNA1载体在DF-1阳性细胞中的敲除活性（37%）最佳,该载体也可定点敲除ESCs中的CPED1基因,敲除活性为25%,且在DF-1细胞中未发生脱靶。表明CRISPR/Cas9可有效介导鸡CPED1基因在DF-1和ESCs上敲除。 

【文章来源】：中国家禽. 2017,39(07)北大核心

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料
    1.2 CPED1基因克隆与靶位点设计
    1.3 gRNA重组质粒的构建
    1.4 DF-1细胞及ESCs的培养与转染
    1.5 T7E1酶切检测
    1.6 Cas9/gRNA敲除载体脱靶效率检测
2 结果
    2.1 CPED1基因克隆与Cas9/gRNA表达载体的构建
    2.2 靶向CPED1基因的Cas9/gRNA活性检测
    2.3 脱靶效率检测
3 讨论
4 结论



本文编号：3095046